[发明专利]用于分析AAV衣壳蛋白的方法在审
| 申请号： | 202080091387.X | 申请日： | 2020-12-30 |
| 公开（公告）号： | CN114902051A | 公开（公告）日： | 2022-08-12 |
| 发明（设计）人： | K·道德;J·李;U·迪尔维斯 | 申请（专利权）人： | 萨勒普塔医疗公司 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68;C07K14/14;C12N15/86;G01N30/72 |
| 代理公司： | 中国专利代理(香港)有限公司 72001 | 代理人： | 罗文锋;初明明 |
| 地址： | 美国马*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 分析 aav 蛋白 方法 | ||
1.一种用于表征腺相关病毒(AAV)颗粒中的VP1衣壳蛋白、VP2衣壳蛋白和VP3衣壳蛋白的方法，所述方法包括：
在约70℃到约90℃下使所述AAV颗粒经受液相色谱；
其中通过质谱和/或紫外(UV)-可见光光谱测定VP1衣壳蛋白、VP2衣壳蛋白和VP3衣壳蛋白的比率。
2.根据权利要求1所述的方法，其中通过所述质谱测定VP1衣壳蛋白、VP2衣壳蛋白和VP3衣壳蛋白的单独质量。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中通过比较所述VP1衣壳蛋白、所述VP2衣壳蛋白和所述VP3衣壳蛋白的紫外色谱图(UV)来测定所述VP1衣壳蛋白、所述VP2衣壳蛋白和所述VP3衣壳蛋白的比率。
4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述液相色谱为反相液相色谱。
5.根据权利要求4所述的方法，其中使用C18柱、C8柱或C4柱进行所述反相液相色谱。
6.根据权利要求5所述的方法，其中使用C8柱进行所述液相色谱。
7.根据权利要求5或6所述的方法，其中所述柱包括约1.2-3.5μm的颗粒。
8.根据权利要求5到7中任一项所述的方法，其中所述柱包括约1.7μm或约1.8μm的颗粒。
9.根据权利要求5到8中任一项所述的方法，其中所述柱为约50mm到约300mm长，并且其内径为约1mm到约4.6mm。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述色谱柱为约100mm长，并且其内径为约2.1mm。
11.根据权利要求1到10中任一项所述的方法，其中所述AAV颗粒具有AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、AAV 13、AAVrh10、AAVrh74血清型或任何天然存在的重组或合成AAV颗粒。
12.根据权利要求1到11中任一项所述的方法，其中所述AAV颗粒具有AAVrh74血清型。
13.根据权利要求1到12中任一项所述的方法，其中在约75℃到约85℃下进行所述液相色谱。
14.根据权利要求1到13中任一项所述的方法，其中在约80℃下进行所述液相色谱。
15.根据权利要求1到14中任一项所述的方法，其中所述液相色谱包括第一流动相，所述第一流动相包括三氟乙酸。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述第一流动相包括约0.05体积％到约0.15体积％的三氟乙酸。
17.根据权利要求15或16所述的方法，其中所述第一流动相包括约0.1体积％的三氟乙酸。
18.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述液相色谱包括第二流动相，所述第二流动相包括含三氟乙酸的乙腈和水的混合物。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述第二流动相包括约0.05体积％到约0.15体积％的三氟乙酸。
20.根据权利要求18或19所述的方法，其中所述第二流动相包括约0.1体积％的三氟乙酸。
21.根据权利要求18到20中任一项所述的方法，其中所述第二流动相包括约80-95体积％的乙腈。
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