[发明专利]通过肽-寡核苷酸复合物的纳米孔易位进行蛋白质和肽指纹识别和测序

权利要求书

1.一种用于使肽(11)易位穿过纳米孔(50)的方法(100)，其中，所述方法(100)包括在寡核苷酸易位酶(20)的存在下使所述肽(11)易位，其中，所述肽(11)由肽-寡核苷酸复合物(10)包含，其中，所述肽(11)连接至寡核苷酸(13)，其中，在至少部分易位期间，所述寡核苷酸易位酶(20)与所述寡核苷酸(13)相关联。

2.根据权利要求1所述的方法(100)，其中，所述寡核苷酸(13)包括DNA寡核苷酸，并且其中，所述寡核苷酸易位酶(20)包括选自包括聚合酶和解旋酶的组的酶。

3.根据前述权利要求中任一项所述的方法(100)，其中，所述方法包括将所述肽(11)和所述寡核苷酸易位酶(20)提供至所述纳米孔(50)的顺式侧(31)，其中，所述纳米孔(50)由纳米孔蛋白(55)提供，其中，所述纳米孔蛋白(55)包括MspA或其突变体，并且其中，所述寡核苷酸易位酶(20)包括Hel308或其突变体。

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法(100)，其中，所述方法包括以足以通过所述寡核苷酸易位酶提供所述肽-寡核苷酸复合物(10)的多次加载的浓度提供所述寡核苷酸易位酶(20)。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法(100)，其中，所述肽(11)具有第一肽末端和第二肽末端，其中，所述第一肽末端连接至所述寡核苷酸(13)，并且其中，所述第二肽末端连接至带负电荷的元件(15)，其中，所述带负电荷的元件选自包括第二寡核苷酸、带电荷的肽和带电荷的非肽化学物质的组。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法(100)，其中，所述纳米孔(50)包括缩颈(51)，其中，所述缩颈(51)具有选自0.5-3nm范围的圆形等效直径d_c，并且其中，所述寡核苷酸易位酶(20)在锚定点(21)处与所述肽-寡核苷酸复合物(10)相关联，其中，在至少部分易位期间，所述缩颈(51)与所述锚定点(21)之间的距离d₁为至少3nm。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法(100)，其中，所述纳米孔(50)被膜(30)包含，其中，所述方法(100)包括提供与所述寡核苷酸(13)至少部分互补的互补寡核苷酸(40)，其中，所述互补寡核苷酸(40)连接至标签(42)，其中，所述标签(42)被配置为与所述膜(30)相关联。

8.根据前述权利要求中任一项所述的方法(100)，其中，所述寡核苷酸易位酶(20)选自包括非溶核酶的组。

9.根据前述权利要求中任一项所述的方法(100)，其中，所述方法(100)包括复合物形成步骤，其中，所述复合物形成步骤包括将所述肽(11)和所述寡核苷酸(13)连接，从而提供所述肽-寡核苷酸复合物(10)。

10.根据前述权利要求中任一项所述的方法(100)，其中，所述方法(100)包括在所述纳米孔(50)上施加电位差。

11.根据权利要求11所述的方法(100)，其中，所述电位差选自10-400mV的范围，并且其中，所述方法(100)包括改变所述寡核苷酸易位酶沿所述寡核苷酸的两个连续步进之间的电位差。

12.一种用于分析肽(11)的分析方法，其中，所述分析方法包括根据前述权利要求中任一项所述的方法(100)，并且其中，所述分析方法包括在易位期间感测易位相关信号。

13.根据权利要求12所述的分析方法，包括：在根据前述权利要求10-11中任一项所述的纳米孔(50)上施加电位差，其中，所述分析方法包括测量通过所述纳米孔(50)的电流并提供电流信号，其中，所述易位相关信号包括所述电流信号。