[发明专利]一种青钱柳三萜皂苷单体分离方法

权利要求书

1.一种青钱柳三萜皂苷单体分离方法，包括以下步骤：

（1）除杂：原料青钱柳总三萜皂苷经过粉碎、过筛、加入混合溶剂，室温搅拌，过滤，得不溶物，所述的混合溶剂为石油醚、环己烷、正己烷、6#溶剂油、120#溶剂油中任意一种溶剂与乙酸乙酯组成的混合溶剂；

（2）硅胶拌样：将不溶物用低碳醇分散、溶解至浸膏状，加入反相硅胶，搅拌均匀，干燥，得拌样硅胶；所述低碳醇选自甲醇、乙醇、丙醇中的至少一种；

（3）装柱：往层析柱筒体中先装入反相硅胶，再在反相硅胶中装入步骤（2）所得拌样硅胶，得反相硅胶层析柱；

（4）反相硅胶柱洗脱：用洗脱剂对反相硅胶层析柱进行洗脱，收集目标洗脱流出液，浓缩，干燥，得青钱柳苷粗品；

（5）色谱分离A：先将青钱柳苷粗品用低极性流动相I溶解稀释，注入高压制备液相色谱柱I，先以低极性流动相I洗脱，收集洗脱液I，浓缩干燥后得到青钱柳苷I；再用高极性流动相II洗脱，得洗脱液II备用；所述高压制备液相色谱柱I中的填料为聚苯乙烯；所述低极性流动相I为乙腈、甲醇、乙醇中的一种和四氢呋喃的混合溶剂，其中乙腈、甲醇或乙醇体积分数为10～20%，高极性流动相II为乙腈、甲醇、乙醇中的一种和水的混合溶剂，乙腈、甲醇或乙醇体积占比为25～40%；

（6）色谱分离B：调节洗脱液II为弱碱性，注入高压制备液相色谱柱II，以高极性流动相II洗脱，得到洗脱液III，浓缩干燥得到青钱柳苷III；在高极性流动相II中加入弱酸，调节高极性流动相II为弱酸性，继续洗脱，得到洗脱液IV，浓缩干燥得到青钱柳苷II；所述高压制备液相色谱柱II中填料含有硼酸基团或偏硼酸；所述高压制备液相色谱柱II中的填料为苯硼酸改性的丙烯酸树脂；所述苯硼酸改性的聚丙烯酸树脂是在聚丙烯酸树脂中加入10-20wt%的4-氨基苯硼酸的乙醇溶液，在羧基活化剂作用下改性得到。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，石油醚、环己烷、正己烷、6#溶剂油、120#溶剂油中任意一种与乙酸乙酯的体积比为6～9：1，单位为L/L。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述低碳醇选自甲醇、乙醇、丙醇中的至少一种；低碳醇的体积用量是步骤(1)不溶物质量的1-3倍，单位为L/kg；

和/或所述反相硅胶的类型为C4、C6、C8、C12、C18中的一种或几种；所述反相硅胶的用量为青钱柳总三萜皂苷样品质量的1～2倍。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）中，所述反相硅胶的用量为青钱柳总三萜皂苷样品质量的8～12倍，所述反相硅胶层析柱的高径比为8～20:1。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（4）中，所述洗脱剂为甲醇、乙醇、异丙醇、乙腈、丙酮的水溶液中的一种或几种，洗脱剂的体积百分比浓度为20～90%，洗脱剂的用量为5～20BV，洗脱的流速为0.5～2BV/小时。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（5）中，所述高压制备液相色谱柱I的柱压为3～6Mpa；色谱填料的粒径为5～20μm；所述色谱填料的用量为青钱柳苷粗品重量的20～40倍，单位为L/kg；所述色谱填料装柱的高径比为2～3：1；所述低极性流动相I洗脱的流速为20～40 BV/小时。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（6）中，所述调节洗脱液II为弱碱性，是指用NaOH和/或KOH稀溶液调节洗脱液II的pH为9-10。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（6）中，所述高压制备液相色谱柱II的柱压为5～8Mpa；色谱填料的粒径为5～20μm；所述色谱填料的用量为青钱柳苷粗品重量的20～40倍，单位为L/kg；所述色谱填料装柱的高径比为2～3：1。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（6）中，所述弱酸为醋酸，加入量为使高极性流动相II中醋酸浓度为1-3wt%。