[发明专利]一种青钱柳三萜皂苷单体分离方法

说明书

本发明涉及一种青钱柳三萜皂苷单体分离方法，包括以下步骤：除杂，硅胶拌样，装柱，反相硅胶柱洗脱，色谱分离A，色谱分离B。其中色谱分离A中先分离出青钱柳苷I，洗脱液再继续进行色谱分离B，利用含有硼酸基团的填料，对青钱柳苷II和青钱柳苷III完成分离。本发明方法原料处理量小，溶剂用量少，生产周期短，工艺连贯、简单，可操作性强，生产成本低，安全环保无污染，适合工业化生产；为青钱柳天然活性成分的深入研究，以及青钱柳资源的应用推广奠定了基础。

技术领域

本发明涉及青钱柳天然活性成分的分离方法，具体涉及一种青钱柳三萜皂苷单体分离方法。

背景技术

青钱柳，胡桃科青钱柳属，是一种高大速生乔木，为我国特产。广泛分布于江西、浙江、江苏、安徽、福建、湖南、湖北、四川、贵州、云南等地。据《中国中药资源志要》记载，其树叶、树皮、树根可入药，性温，味辛微苦，具有清热消肿、解毒止痛的功能。长期以来，民间有传统取其叶制茶做饮料，有清热降暑、降血压、治疗高血压和糖尿病，以致延年益寿等功效，故又称其为甜茶树、神茶树、摇钱树。

青钱柳中最重要的天然活性成分是三萜类化合物，青钱柳中的三萜类化合物的种类繁多，包括三萜皂苷以及三萜酸类。

青钱柳三萜酸类化合物包括：青钱柳酸A、青钱柳酸B、α-乳香酸、β-乳香酸、齐墩果酸、阿江榄仁酸、乌苏酸、2α-羟基乌苏酸等。其中，青钱柳酸A、青钱柳酸B、α-乳香酸、β-乳香酸、齐墩果酸的分子构型属于齐墩果烷型五环三萜；乌苏酸和2α-羟基乌苏酸的分子构型属于乌苏烷型五环三萜。

青钱柳三萜皂苷类化合物包括：青钱柳苷Ⅰ、青钱柳苷Ⅱ、青钱柳苷Ⅲ、青钱柳苷A、青钱柳苷B、青钱柳苷C等。其中，青钱柳苷A、青钱柳苷B、青钱柳苷C和青钱柳苷Ⅰ的分子构型属于20，24-环氧达玛烷型四环三萜皂苷；青钱柳苷Ⅱ和青钱柳苷Ⅲ的分子构型属于2，3-裂环达玛烷型四环三萜皂苷。

不同的青钱柳三萜类化合物都有不同或不同程度的风味、生理活性和营养保健作用，例如：青钱柳中的三萜皂苷，如青钱柳苷I(cyclocarioside I)、青钱柳苷Ⅱ(cyclocariosideⅡ)、青钱柳苷Ⅲ(cyclocariosideⅢ)等，属于新型的天然甜味剂，能够满足高血糖患者对甜味的需求，而不加重病情，同时在降糖、降脂、降压方面具有很好的作用。其中青钱柳苷I的甜度约是蔗糖的250倍。齐墩果酸、乌苏酸，虽然不是甜味剂，但是具有清除自由基、抗氧化、抗菌消炎、保肝护肝等作用。

CN107753552A公开了一种青钱柳叶提取物的制备方法，是以青钱柳叶为原料，经高温水提法或低温逆流水提法、蝶式分离、UHT杀菌过滤、冷冻干燥等步骤，等到青钱柳叶提取物。

CN110183545A公开了一种青钱柳多糖的提取及脱色方法，是以青钱柳叶为原料，经水浸泡、复合溶壁酶酶解、超声辅助三级逆流提取、醇沉、水溶解、超声辅助树脂脱色等步骤，得到青钱柳多糖。

CN108567142A公开了一种青钱柳总黄酮的制备方法，是以青钱柳干叶为原料，经粉碎、低温酶提取、活性炭脱色、大孔树脂纯化等步骤，获得含量约为80％的青钱柳总黄酮。

CN109364119A公开了从青钱柳叶中制备具有降血糖作用的总三萜的方法及应用，是以青钱柳叶为原料，经乙醇水混合溶剂提取、有机溶剂液液萃取后、聚酰胺柱色谱有机溶剂洗脱、大孔树脂柱色谱乙醇水洗脱等步骤，得到青钱柳总三萜。

CN 103694364 A公开了一种青钱柳多糖和黄酮同步提取分离与纯化的方法，是将青钱柳叶预处理后，通过用30％乙醇提取，经过调节浓缩液预处理，稀醇上样、AB-8号大孔树脂及D301强酸型阳离子交换树脂的组合串联分离、浓乙醇、0.5mol/L氨水溶液洗脱，经浓缩、冷冻干燥分别得到纯度较高的黄酮、多糖两种生物活性物质。