[发明专利]PCSK9靶点药物细胞活性和结合活性检测方法

说明书

本发明公开了PCSK9靶点药物细胞活性和结合活性检测方法，涉及细胞活性检测技术领域，该PCSK9靶点药物细胞活性和结合活性检测方法，包括如下步骤：S1：将PCSK9与肝细胞表面的LDL受体结合，使LDLR降解，血浆LDL‑C水平升高；S2：在步骤S1中加入PCSK9抗体，PCSK9抗体与游离PCSK9快速结合；S3：在相同环境下做对照组一，在步骤S1中加入小干扰RNA；S4：在相同环境下做对照组二，在步骤S1中加入模拟抗体蛋白药；S5：在相同环境下做对照组三，在步骤S1中加入小分子抑制药。本发明设置对照组一、对照组二和对照组三分别与加入PCSK9抗体的实验组对照，通过分析和观察LDLR的数目变化和LDL‑C的水平，直接观察PCSK9靶点药物细胞活性和结合活性，解决了对PCSK9靶点药物细胞活性和结合活性检测的问题。

技术领域

本发明涉及细胞活性检测技术领域，具体为PCSK9靶点药物细胞活性和结合活性检测方法。

背景技术

PCSK9是一种肝源性分泌蛋白，肝脏是血液中PCSK9的主要来源，它与LDLR的胞外区结合，然而PCSK9对LDLR降解作用是胞内的。PCSK9并不需要激酶的催化活性来影响LDLR的转化，激酶的催化活性不能引导带受体的复合体到复合体降解的溶酶体中或是抑制复合体的循环。PCSK9作为一种神经细胞凋亡调节转化酶，不但参与肝脏再生，调节神经细胞凋亡，还能通过降低肝细胞上LDLR的数量，影响LDL内化，使血液中LDL不能清除，从而导致高胆固醇血症。

研究表明，PCSK9水平与胆固醇、ox-LDL、甘油三酯显著相关。PCSK9作为一种丝氨酸蛋白酶，除了能够降解LDLR，升高血LDL水平之外，还有其他多种生物学功能，例如，参与神经系统发育、神经细胞的凋亡和调节钠通道、胰岛细胞功能等。PCSK9的产生过程是首先在内质网中合成PCSK9酶原，其在内质网或者高尔基体内发生自我催化反应，裂解释放出前肽，形成成熟的蛋白酶，并立即分泌入血，通过调节LDLR维持血浆脂质的稳态，其不仅能影响血浆胆固醇的水平，调节神经细胞的凋亡，还与炎症反应有一定的相关性。

近年来随着对PCSK9结构和功能的深入研究，发现PCSK9是多类药物的细胞内作用靶点，与相关药物之间存在广泛而复杂的相互作用。研究PCSK9与相关药物之间的相互作用对于明确药物作用机制、研发新药和避免药物毒副作用等方面具有重要意义。

对PCSK9靶点药物在体内的作用结合位点的细胞活性和结合活性的检测是研究的根本，为此我们提供了PCSK9靶点药物细胞活性和结合活性检测方法。

发明内容

(一)解决的技术问题

本发明提供了PCSK9靶点药物细胞活性和结合活性检测方法，通过多组对照检测各组LDLR和LDL-C的含量，通过对比可直接观察数据的变化，用于解决对PCSK9靶点药物细胞活性和结合活性检测的问题。

(二)技术方案

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：PCSK9靶点药物细胞活性和结合活性检测方法，包括如下步骤：

S1：将PCSK9与肝细胞表面的LDL受体结合，使LDLR降解，血浆LDL-C水平升高。

S2：在步骤S1中加入PCSK9抗体，PCSK9抗体与游离PCSK9快速结合。

S3：在相同环境下做对照组一，在步骤S1中加入小干扰RNA。

S4：在相同环境下做对照组二，在步骤S1中加入模拟抗体蛋白药。

S5：在相同环境下做对照组三，在步骤S1中加入小分子抑制药。

优选的，在步骤S2中，所述PCSK9的抗体能干扰PCSK9与LDLR的结合，使肝脏再循环表达更大比例的表面受体LDLR，降低血浆LDL-C水平。