[发明专利]异源合成黄酮类化合物的宿主细胞及其应用

权利要求书

1.一种用于合成黄芩素、野黄芩素类化合物的原核细胞，其包括外源的下组酶的编码基因：黄酮6-羟化酶，细胞色素P450氧化还原酶，苯丙氨酸解氨酶、4-香豆酸辅酶A连接酶、查尔酮合成酶、查尔酮异构酶和黄酮合成酶I；且所述酶被表达后，苯丙氨酸解氨酶和4-香豆酸辅酶A连接酶构成复合体。

2.一种用于合成白杨素类化合物的原核细胞，其包括外源的下组酶的编码基因：苯丙氨酸解氨酶、4-香豆酸辅酶A连接酶、查尔酮合成酶、查尔酮异构酶和黄酮合成酶I；且所述酶被表达后，苯丙氨酸解氨酶和4-香豆酸辅酶A连接酶构成复合体。

3.如权利要求1或2所述的原核细胞，其特征在于，所述的苯丙氨酸解氨酶和4-香豆酸辅酶A连接酶的复合体包括：

苯丙氨酸解氨酶和4-香豆酸辅酶A通过蛋白-蛋白相互作用结构域及其配体的结合而靠近，获得复合体；或

苯丙氨酸解氨酶和4-香豆酸辅酶A连接酶直接连接或通过连接子连接、获得融合蛋白形式的复合体。

4.如权利要求3所述的原核细胞，其特征在于，所述蛋白-蛋白相互作用结构域包括选自下组的结构域：PDZ结构域，SH3结构域，WW结构域，LIM结构域，DD结构域，PH结构域，EH结构域，GBD结构域。

5.如权利要求3所述的原核细胞，其特征在于，所述蛋白-蛋白相互作用结构域包括PDZ结构域，其配体为PDZ ligand；所述苯丙氨酸解氨酶和4-香豆酸辅酶A分别与所述PDZ结构域及其配体融合；较佳地，所述苯丙氨酸解氨酶与PDZ融合、所述4-香豆酸辅酶A与PDZligand融合；更佳地，所述苯丙氨酸解氨酶与PDZ融合时还包括以ER/K连接子连接，所述4-香豆酸辅酶A与PDZ ligand融合时还包括以(GGGGS)₂连接子连接。

6.如权利要求3所述的原核细胞，其特征在于，所述蛋白-蛋白相互作用结构域包括SH3结构域，其配体为SH3 ligand；所述苯丙氨酸解氨酶和4-香豆酸辅酶A分别与所述SH3结构域及其配体融合；较佳地，所述苯丙氨酸解氨酶与SH3融合、所述4-香豆酸辅酶A与SH3ligand融合；更佳地，所述苯丙氨酸解氨酶与SH3融合时还包括以ER/K连接子连接，所述4-香豆酸辅酶A与SH3 ligand融合时还包括以(GGGGS)₂连接子连接。

7.如权利要求5或6所述的原核细胞，其特征在于，所述苯丙氨酸解氨酶与PDZ融合时，所述苯丙氨酸解氨酶位于N端，所述PDZ位于C端；或

所述4-香豆酸辅酶A与PDZ ligand融合时，所述PDZ ligand位于N端，所述4-香豆酸辅酶A位于C端；或

所述苯丙氨酸解氨酶与SH3融合时；所述苯丙氨酸解氨酶位于N端，所述SH3位于C端；或

所述4-香豆酸辅酶A与SH3 ligand融合时，所述SH3 ligand位于N端，所述4-香豆酸辅酶A位于C端。

8.如权利要求1所述的原核细胞，其特征在于，所述细胞中还包括外源的促进丙二酰CoA生成的酶的编码基因；较佳地，包括matC，matB，ACS，FabF。

9.如权利要求1所述的原核细胞，其特征在于，所述的原核细胞为大肠杆菌细胞。

10.如权利要求1～9任一所述的原核细胞，其特征在于，所述细胞中还包括外源的促进苯丙氨酸合成的酶的编码基因；较佳地，包括：aroG，pheA；更佳地，所述pheA为第976位由A突变为C的基因；更佳地，所述aroG为第436位由G突变为A的基因。

11.权利要求1、3～10任一所述的原核细胞的应用，用于合成黄芩素或野黄芩素类化合物。

12.权利要求2、3～10任一所述的原核细胞的应用，用于合成白杨素类化合物。