[发明专利]用于单细胞检测和分析的方法及其应用

权利要求书

1.一种用于单细胞检测和分析的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

将含细胞的样品、细胞裂解剂、添加剂和PCR试剂引入数字PCR仪，在数字PCR仪的微滴生成仪中，含有细胞裂解剂、添加剂和PCR试剂的细胞分离体系被包裹在微滴中，每个微滴中含有0-1个单细胞；然后在使细胞发生裂解的条件下进行裂解并对裂解产物中的目标序列进行扩增，所述使细胞发生裂解的条件包括：温度80-90℃，时间30-90min；再基于扩增结果进行统计分析；

其中，所述细胞裂解剂在所述细胞分离体系中的终浓度为0.01-0.15重量％；

所述含细胞的样品中的细胞数为5-1000个；

所述添加剂选自海藻糖和甘油，且所述海藻糖在所述细胞分离体系中的浓度为0.5-1重量％，所述甘油在所述细胞分离体系中的浓度为15-25体积％；

所述细胞裂解剂选自十二烷基硫酸钠；

所述PCR试剂包括：目标序列的引物和/或探针、ddPCR Supermix和水。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述水为无核酸酶的灭菌水。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述方法还包括：检测目标序列的表达量。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述方法中采用的PCR试剂中的引物和/或探针为所述目标序列对应的mRNA的引物和/或探针。

5.权利要求1-4中任意一项所述的方法在非诊断目的地检测循环肿瘤细胞、验证单细胞测序结果、检测靶蛋白在细胞中的表达、检测单细胞中的基因突变中的应用。