[发明专利]非洲猪瘟病毒I177L基因重组质粒、表达载体及制备方法在审
| 申请号： | 202110013458.0 | 申请日： | 2021-01-06 |
| 公开（公告）号： | CN112626101A | 公开（公告）日： | 2021-04-09 |
| 发明（设计）人： | 黄淑坚;曾繁聪;陈耀;杨惠湖;罗瑞;柯骏鸿;姜含雨;谢梓民 | 申请（专利权）人： | 佛山科学技术学院 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/66;C12N15/34;C12N15/10;C12P21/02 |
| 代理公司： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人： | 刘俊文 |
| 地址： | 528000 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 非洲 猪瘟 病毒 i177l 基因 重组 质粒 表达 载体 制备 方法 | ||
1.非洲猪瘟病毒I177L基因重组质粒的制备方法，其特征在于，包括步骤：
向I177L基因两端添加NotⅠ和EcoRⅠ酶切位点后，连入经NotⅠ和EcoRⅠ双酶切的pMAL-c5X载体中，得到重组质粒pMAL-I177L。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述向I177L基因两端添加NotⅠ和EcoRⅠ酶切位点由以下步骤实现：合成含有NotⅠ酶切位点的引物I177L-NotⅠ-F，以及含有EcoRⅠ酶切位点的引物I177L-EcoRⅠ-R；以I177L基因为模板，使用引物I177L-NotⅠ-F和I177L-EcoRⅠ-R扩增出含有NotⅠ和EcoRⅠ酶切位点的目的片段。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述I177L-NotⅠ-F的序列如SEQ IDNo.1所示，所述I177L-EcoRⅠ-R的序列如SEQ ID No.2所示。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，扩增所述目的片段的扩增体系包括rTaq酶12.5μL，I177L-NotⅠ-F 1μL，I177L-EcoRⅠ-R 1μL，I177L基因模板2μL，ddH2O 8.5μL；扩增条件为94℃，2min；94℃，30s，63℃，30s，72℃，40s，35cycles；72℃，10min。
5.编码非洲猪瘟病毒I177L基因的重组质粒pMAL-I177L，其特征在于，由权利要求1所述制备方法制得。
6.一种I177L蛋白的表达载体，其特征在于，包含如权利要求5所述的重组质粒pMAL-I177L的Rosetta(DE3)菌株。
7.I177L蛋白的原核表达方法，其特征在于，将如权利要求5所述的表达载体扩大培养，再接种入LB培养基，37℃振摇培养至OD值约为0.6时，加入终浓度为0.2～2.0mM的IPTG，37℃220rpm振摇诱导3～6h；优选地，所述IPTG浓度为0.8mM；优选地，所述诱导时长为4h。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于佛山科学技术学院，未经佛山科学技术学院许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202110013458.0/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
