[发明专利]新冠病毒重组融合蛋白、其制备方法和应用

说明书

本发明提供一种新冠病毒重组融合蛋白、其制备方法和应用。本发明通过对新冠病毒S和N重组融合蛋白的基因序列进行设计，选择最优的片段进行整合，再通过人源HEK293细胞系统重组表达融合蛋白，经过纯化后对融合蛋白的分子量、纯度进行检测，最后利用融合蛋白制成新冠病毒抗体胶体金检测试纸条/试剂盒。与单独使用S蛋白或N蛋白制备的胶体金检测试纸条相比，该重组融合蛋白制备的胶体金检测试纸条具有更高的灵敏度和更低的漏检率。此外，本发明提供的新冠病毒重组融合蛋白可广泛应用于不同平台技术的新冠抗体检测试剂盒开发，如胶体金、荧光免疫层析、化学发光和酶联免疫等。

技术领域

本发明涉及分子生物学和免疫学领域，具体地说，涉及新冠病毒重组融合蛋白、其制备方法和应用。

背景技术

新型冠状病毒，即“SARS-CoV-2 (2019-nCoV)”，于2019年首次被发现，与2002年的SARS冠状病毒和2012年的MERS冠状病毒同属于β冠状病毒属，是目前已知的第七种能感染人的冠状病毒。新型冠状病毒肺炎的传染性强、传播速度快、致死率较高，给世界公共卫生安全带来巨大威胁。

新型冠状病毒由四种结构蛋白（棘突蛋白、包膜蛋白、膜蛋白和核衣壳蛋白）以及RNA核酸链组成。其中棘突蛋白（Spike Glycoprotein，S蛋白）位于新冠病毒膜表面，能够结合人的血管紧张素转换酶2（Angiotensin-Converting Enzyme 2，ACE2），促进病毒包膜和宿主细胞膜的融合，进而介导病毒感染人的呼吸道上皮细胞，是新冠病毒最重要的表面膜蛋白，也是新冠疫苗及中和抗体设计与开发的热门靶点。S蛋白胞外域由S1和S2两个亚基组成，S1亚基主要包含有受体结合区（Receptor Binding Domain，RBD），负责识别宿主细胞的受体ACE2，S2亚基含有膜融合过程所需的基本元件，能够促进病毒与宿主细胞膜的融合。核衣壳蛋白（Nucleocapsid Protein，N蛋白）是冠状病毒中含量最丰富且序列最保守的结构蛋白，具有较强的免疫原性。

核酸检测是目前新冠肺炎确诊的“金标准”，但核酸检测有很大的局限性，例如当前普遍应用的鼻咽拭子采样有时难以采集到病毒，再加上试剂本身的敏感度问题，核酸检测可能会出现漏检。机体在感染新冠病毒后 能够产生针对病毒抗原的特异性抗体，因此可通过检测抗体来确诊病毒性传染病以及进行流行病学调查。新冠病毒抗体检测作为新冠肺炎确诊的重要辅助方式，具有实验环境要求低、操作简便、检测时间短等优点，可与核酸检测相互补充以提高诊断准确率，有助于国家对疫情整体形势进行判断和追踪。因此，研制高灵敏度、高特异性的新型冠状病毒抗体检测试剂盒对于疫情的防控和溯源具有重要意义。

针对新冠肺炎产生的特异性IgM抗体主要为S蛋白，而IgG抗体可以是N蛋白和S蛋白，目前商业化的抗体检测试剂盒主要以N蛋白或S蛋白为抗原检测样本中的新冠病毒抗体。相较于单一抗原，通过基因工程技术将S蛋白和N蛋白的优势表位进行整合，将重组表达出融合蛋白进行新冠抗体检测试剂盒的开发，可提高检测试剂盒的灵敏度，降低漏检率，进一步提升抗体检测试剂盒的准确率。

发明内容

本发明的目的是提供一种新冠病毒重组融合蛋白、其制备方法和应用。

为了实现本发明目的，第一方面，本发明提供一种新冠病毒重组融合蛋白，其为：

i）如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；

ii）在i）的N端和/或C端连接标签得到的氨基酸序列。

第二方面，本发明提供编码所述重组融合蛋白的核酸分子。

优选地，所述核酸分子的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

第三方面，本发明提供含有所述核酸分子的生物材料，所述生物材料包括但不限于重组DNA、表达盒、转座子、质粒载体、病毒载体、工程菌或转基因细胞系。