[发明专利]靶向CD30和CD24的双靶点CAR-T细胞的构建方法及应用

说明书

本发明提出了靶向CD30和CD24的双靶点CAR‑T细胞的制备及其应用，CAR‑T细胞嵌合抗原受体包括抗CD30单链抗体、抗CD24单链抗体、铰链区、跨膜区、胞内区。双靶点CAR‑T可以很好地解决单CAR‑T的脱靶效应，且不会大程度地加重细胞因子释放综合征，获得更好的杀瘤效果。

技术领域

本发明涉及基因工程领域，尤其是靶向CD30和CD24的双靶点CAR-T细胞的构建方法及应用。

背景技术

嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)治疗是目前治疗难治复发血液系统肿瘤的重要方法。针对B细胞急性白血病，淋巴瘤，获得了非常好的疗效数据。但此疗法缺乏肿瘤特异性的靶抗原，易产生脱靶效应，引起针对B细胞抗原的CAR-T会杀伤B细胞导致体液免疫功能缺失，以及严重的细胞因子释放综合征(CRS)等，因此靶点的选择是CAR-T细胞治疗重要的研究内容。

CD30是肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)成员之一，属于Ⅰ型跨膜糖蛋白，高表达于霍奇金淋巴瘤(HL)和间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)，低表达于非病理状态下活化的T细胞、B细胞表面，而正常细胞不表达。CD24，是一个高度糖基化的糖基磷脂酰肌醇锚定的细胞表面蛋白。CD24和固有免疫细胞上的Siglec-10分子相互作用，传递免疫抑制性信号，来抑制炎症反应。

本发明通过靶向CD30和CD24的双靶点CAR-T细胞识别和清除CD30和CD24阳性的恶性肿瘤细胞，避免了单靶点CAR存在的脱靶效应，且不会大程度地加重细胞因子释放综合征，获得更好的杀瘤效果。

发明内容

有鉴于此，本发明提出了靶向CD30和CD24的双靶点CAR-T细胞治疗淋巴瘤。

本发明的技术方案是这样实现的：靶向CD30和CD24的双靶点CAR-T细胞，所述双靶点CAR-T细胞嵌合抗原受体包括抗CD30单链抗体、抗CD24单链抗体、铰链区、跨膜区和胞内区。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述CD30单链抗体包括抗CD30单链抗体的轻链和抗CD30单链抗体的重链。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述抗CD24单链抗体包括CD24单链抗体的轻链和抗CD24单链抗体的重链。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述铰链区包括CD8α。

在以上技术方案的基础上，优选的，跨膜区包括CD28。

在以上技术方案的基础上，优选的，胞内区包括CD28、4-1BB和CD3ζ。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述抗CD30单链抗体的轻链的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述抗CD30单链抗体的重链的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述抗CD24单链抗体的轻链的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述抗CD24单链抗体的重链的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述CD8α铰链区的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述CD28跨膜区和胞内区的核苷酸序列如SEQID NO.6所示。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述4-1BB胞内区的核苷酸序列如SEQ IDNO.7所示。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述CD3ζ胞内区的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示。

更进一步优选的，靶向CD30和CD24的双靶点CAR-T细胞的构建方法，其特征在于，步骤如下：