[发明专利]一种两阶段调节CHO表达外源蛋白糖型的方法有效
| 申请号： | 202110029172.1 | 申请日： | 2021-01-11 |
| 公开（公告）号： | CN112779307B | 公开（公告）日： | 2022-04-19 |
| 发明（设计）人： | 孔文刚;赵雪娜;陶佳林;王永忠 | 申请（专利权）人： | 苏州药明生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12P21/02 | 分类号： | C12P21/02;C12P21/08;C07K19/00;C07K16/32;C07K16/28;C07K16/40 |
| 代理公司： | 北京精金石知识产权代理有限公司 11470 | 代理人： | 尉月丽 |
| 地址： | 215123 江苏省苏州市苏州工*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 阶段 调节 cho 表达 蛋白 方法 | ||
1.一种两阶段调节CHO表达外源蛋白糖型的方法，其特征在于，
所述CHO表达外源蛋白为抗ALK-1的IgG2型单克隆抗体；
所述方法包括第一阶段和第二阶段；
所述第一阶段为调整基础培养基和补料培养基的类型和添加量；
所述第二阶段为调整酶的辅因子；
所述基础培养基为Actipro，所述补料培养基为Cell Boost 7a和Cell Boost7b，所述酶的辅因子为氯化锰，所述的氯化锰工作浓度为20μM；
所述糖型为Man5。
2.一种两阶段调节CHO表达外源蛋白糖型的方法，其特征在于，
所述CHO表达外源蛋白为IgG4型的IL10R-Fc融合蛋白；
所述方法包括第一阶段和第二阶段；
所述第一阶段为调整基础培养基和补料培养基的类型和添加量；
所述第二阶段为调整酶的辅因子和糖基合成前体物质的浓度；
所述基础培养基为Dynamis，所述补料培养基的为Efficient Feed C plus，所述酶的辅因子为氯化锰，所述的氯化锰工作浓度为40μM；所述糖基合成前体物质为尿苷，所述的尿苷的工作浓度为10mM；
所述糖型为Man5。
3.一种两阶段调节CHO表达外源蛋白糖型的方法，其特征在于，
所述CHO表达外源蛋白为抗Her2的IgG1型单克隆抗体；
所述方法包括第一阶段和第二阶段；
所述第一阶段为调整基础培养基和补料培养基的类型和添加量；
所述第二阶段为调整酶的辅因子和糖基合成前体物质的浓度；
所述基础培养基为Dynamis，所述补料培养基的为Efficient Feed C plus，所述酶的辅因子为氯化锰，所述的氯化锰工作浓度为40μM，所述糖基合成前体物质为尿苷和半乳糖，所述的尿苷的工作浓度为7.5mM，所述的半乳糖的工作浓度为20mM；
所述糖型为Man5、半乳糖糖基化和非岩藻糖基化。
4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，所述的补料培养基补料总量为初始培养基重量的25-45％，补料次数为4-12次。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，第一阶段还包括调整工艺参数，所述的工艺参数包括细胞的接种密度和培养温度；所述的接种密度为0.6×106-1.0×106cells/mL，所述的培养温度为32-37℃。
6.权利要求1-5任一项所述的方法在CHO表达单克隆抗体或融合蛋白中的应用。
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