[发明专利]一种硫还原地杆菌胞外多糖的提取纯化方法

权利要求书

1.一种硫还原地杆菌胞外多糖的提取纯化方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）悬浮：将硫还原地杆菌的生物膜用浓度为体积比0.9%的NaCl溶液悬浮，得到生物膜悬浮液；

（2）提取和去蛋白：将生物膜悬浮液采用EDTA法粗提取，得到的粗提液采用Sevag法去除蛋白质；

（3）分离胞外多糖：加入乙醇，醇沉，离心，将沉淀物中加入去离子水，重悬浮，得到胞外多糖溶液；

（4）纯化：将胞外多糖溶液采用超滤管过滤，离心，得到硫还原地杆菌胞外多糖；

所述的硫还原地杆菌为硫还原地杆菌（Geobacter sulfurreducens）PCA；

步骤（2）中所述的EDTA法粗提取是加入与生物膜悬浮液等体积的2%Na2-EDTA，混匀，4℃放置4h，5000g、4℃下离心20min，取上清液，过滤，得到粗提液；所述过滤为采用孔径为0.22μm的滤膜过滤。

2.根据权利要求1 所述的硫还原地杆菌胞外多糖的提取纯化方法，其特征在于，步骤（2）中所述Sevag法去除蛋白质：将由氯仿和正丁醇以4：1 的体积比配制的Sevag液与粗提液按1：4 的体积比混合，剧烈振荡30min，6000r/min离心10min，取上层水层；重复用Sevag法除蛋白5次，直至蛋白质被去除80%。

3.根据权利要求1所述的硫还原地杆菌胞外多糖的提取纯化方法，其特征在于，

步骤（3）中所述乙醇用量为体系中浓度为体积比80%；

步骤（3）中所述醇沉为4℃醇沉24h；

步骤（3）中所述离心为6000r/min，离心10min；

步骤（3）中所述去离子的用量为5mL。

4.根据权利要求1所述的硫还原地杆菌胞外多糖的提取纯化方法，其特征在于，

步骤（4）中所述超滤管为Millipore 3 KD 超滤管；

步骤（4）中所述离心为5000g、4℃下离心1h；

步骤（4）中所述过滤和所述离心的步骤重复3-5次，每次采用去离子水混合滤液。

5.根据权利要求1所述的硫还原地杆菌胞外多糖的提取纯化方法，其特征在于，步骤（1）中所述生物膜采用微生物燃料电池培养得到。