[发明专利]一种含羟脯氨酸修饰化的重组人III型胶原蛋白成熟肽及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种编码重组人III型胶原蛋白成熟肽的基因，其特征在于为如下A1所示的基因：

A1）核苷酸序列是序列表中序列17的cDNA分子或DNA分子。

2.一种与重组人III型胶原蛋白成熟肽相关的生物材料，其特征在于为下述B1）至B4）中的任一种：

B1）含有权利要求1所述的编码重组人III型胶原蛋白成熟肽的基因的表达盒；

B2）含有权利要求1所述的编码重组人III型胶原蛋白成熟肽的基因的重组载体、或含有B1）所述表达盒的重组载体；

B3）含有权利要求1所述的编码重组人III型胶原蛋白成熟肽的基因的重组微生物、或含有B1）所述表达盒的重组微生物、或含有B2）所述重组载体的重组微生物；

B4）含有权利要求1所述的编码重组人III型胶原蛋白成熟肽的基因的转基因细胞系、或含有B1）所述表达盒的转基因细胞系、或含有B2）所述重组载体的转基因细胞系。

3.一种重组载体，其特征在于是将脯氨酸羟化酶表达载体pPZAStA-P4HA2-P4HB2与权利要求1所述的编码重组人III型胶原蛋白成熟肽的基因的核苷酸序列连接得到；

所述的脯氨酸羟化酶表达载体pPZAStA-P4HA2-P4HB2，通过如下方法制得：

（1）以pPICZaA为骨架，通过BglII和BamH I酶切位点引入毕赤酵母邻氨基苯甲酸合成酶基因，得到pPZSaA载体；

（2）以pPZSaA载体为骨架，通过串联表达方式在多克隆位点分别引入P4HA2和P4HB2基因，得到pPZAStA-P4HA2-P4HB2。

4.一种可表达含羟脯氨酸修饰化的重组人III型胶原蛋白成熟肽的酵母，其特征在于是将权利要求3所述的重组载体转入酵母中得到。

5.根据权利要求4所述的可表达含羟脯氨酸修饰化的重组人III型胶原蛋白成熟肽的酵母，其特征在于：

所述的酵母为毕赤酵母。

6. 根据权利要求4或5所述的可表达含羟脯氨酸修饰化的重组人III型胶原蛋白成熟肽的酵母，其特征在于为Pichia pastoris HQC-119，于2020年12月3日保藏于广东省微生物菌种保藏中心（GDMCC），地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5栋，保藏编号为GDMCCNo.61338。

7.一种含羟脯氨酸修饰化的重组人III型胶原蛋白成熟肽的制备方法，其特征在于包含如下步骤：

将权利要求4~6任一项所述的可表达含羟脯氨酸修饰化的重组人III型胶原蛋白成熟肽的酵母诱导表达后，离心收集上清，上清通过硫酸铵分级沉淀和阳离子交换层析纯化，得到含羟脯氨酸修饰化的重组人III型胶原蛋白成熟肽。

8.一种含羟脯氨酸修饰化的重组人III型胶原蛋白成熟肽，其特征在于通过权利要求7所述的制备方法制备得到。

9.权利要求8所述的含羟脯氨酸修饰化的重组人III型胶原蛋白成熟肽在制备生物修复产品中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：

所述的生物修复产品为冻干粉、生物海绵和敷料中的至少一种。