[发明专利]半胱氨酸蛋白酶抑制剂B检测装置及其制备方法和应用有效
申请号: | 202110031200.3 | 申请日: | 2021-01-11 |
公开(公告)号: | CN112858434B | 公开(公告)日: | 2022-08-16 |
发明(设计)人: | 卫彦;邓旭亮;闻利平;肖作慧;黄晨燕;孔祥玉 | 申请(专利权)人: | 北京大学口腔医学院 |
主分类号: | G01N27/327 | 分类号: | G01N27/327;G01N27/48 |
代理公司: | 北京怡丰知识产权代理有限公司 11293 | 代理人: | 于振强 |
地址: | 100081 北*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 半胱氨酸 蛋白酶 抑制剂 检测 装置 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种半胱氨酸蛋白酶抑制剂B检测装置的制备方法,其特征是,包括如下步骤:
(1)使用重离子轰击聚对苯二甲酸乙二酯膜,形成轰击轨道;
(2)用紫外灯辐照所述步骤(1)得到的重离子轰击后的聚对苯二甲酸乙二酯膜;
(3)将所述(2)得到的聚对苯二甲酸乙二酯膜进行非对称光纳米孔刻蚀,得到非对称纳米通道膜;
(4)在室温下,用N-(3-二甲氨基丙基)-N’-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基磺酰基琥珀酰亚胺钠盐的水溶液浸泡所述步骤(3)得到的膜,使膜上的羧基被激活;
(5)蒸馏水冲洗所述步骤(4)得到的膜,浸泡在半胱氨酸蛋白酶抑制剂B单克隆抗体的水溶液中,使抗体反应并最终将抗体固定在膜内表面,即为半胱氨酸蛋白酶抑制剂B的检测装置。
2.根据权利要求1所述的半胱氨酸蛋白酶抑制剂B检测装置的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)中,刻蚀所用刻蚀液为氢氧化钠溶液,阻止液为甲酸和氯化钾。
3.根据权利要求2所述的半胱氨酸蛋白酶抑制剂B检测装置的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)中,将膜夹持在刻蚀装置中,在膜的正极一侧加入所述刻蚀液,负极一侧加入所述阻止液,监测电流变化,然后将正极一侧的刻蚀液吸出并用阻止液清洗,最后加入新的阻止液,得到非对称纳米通道膜。
4.按照权利要求1所述的半胱氨酸蛋白酶抑制剂B检测装置的制备方法制得的半胱氨酸蛋白酶抑制剂B检测装置,其特征是,所述半胱氨酸蛋白酶抑制剂B检测装置为聚对苯二甲酸乙二酯膜,所述聚对苯二甲酸乙二酯膜设有非对称纳米孔,所述非对称纳米孔为不对称而连续的锥形。
5.根据权利要求4所述的半胱氨酸蛋白酶抑制剂B检测装置,其特征为,所述非对称纳米孔设有大口端和小口端,所述大口端的直径为400nm-650nm,所述小口端的直径为5nm-35nm。
6.如权利要求4所述的半胱氨酸蛋白酶抑制剂B检测装置在制备口腔鳞状细胞癌检测设备中的应用。
7.根据权利要求6所述的半胱氨酸蛋白酶抑制剂B检测装置在制备口腔鳞状细胞癌检测设备中的应用,其特征在于,包括如下步骤:
(A)使用重离子轰击聚对苯二甲酸乙二酯膜,形成轰击轨道;
(B)用紫外灯辐照所述步骤(A)得到的重离子轰击后的聚对苯二甲酸乙二酯膜;
(C)将所述(B)得到的聚对苯二甲酸乙二酯膜进行非对称光纳米孔刻蚀,得到非对称纳米通道膜;
(D)在室温下,用N-(3-二甲氨基丙基)-N’-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基磺酰基琥珀酰亚胺钠盐的水溶液浸泡所述步骤(C)得到的膜,使膜上的羧基被激活;
(E)用蒸馏水冲洗所述步骤(D)得到的膜,浸泡在半胱氨酸蛋白酶抑制剂B单克隆抗体的水溶液中,使抗体反应并最终将抗体固定在膜内表面,即为半胱氨酸蛋白酶抑制剂B的检测装置;
(F)使用不同标准浓度梯度的半胱氨酸蛋白酶抑制剂B溶液滴在纳米通道表面,后测试纳米通道两侧的电流水平;
(G)将唾液离心得到上清液,将所述上清液滴加在纳米孔道上,检测膜两侧电流。
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