[发明专利]半胱氨酸蛋白酶抑制剂B检测装置及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种半胱氨酸蛋白酶抑制剂B检测装置及其制备方法和应用，其解决了现有半胱氨酸蛋白酶抑制剂B本身唾液检测方法浓度检测范围及检测变化区间均有限，无法灵敏、特异性地检测出其浓度减低的技术问题，其为聚对苯二甲酸乙二酯膜，聚对苯二甲酸乙二酯膜设有非对称纳米孔，非对称纳米孔为不对称而连续的锥形。本发明同时提供了其制备方法和应用。本发明可用于半胱氨酸蛋白酶抑制剂B检测领域。

技术领域

本发明涉及一种唾液成分的检测装置及其制备方法和应用，具体地说，涉及半胱氨酸蛋白酶抑制剂B检测装置及其制备方法和应用。

背景技术

近年来，用于检测口腔癌生物标志物的生物体液检查是对传统检测方法的革命性改变。经过研究发现，唾液中的一种常见蛋白质“半胱氨酸蛋白酶抑制剂B(Cystatin B：CSTB)”的含量减低是预测口腔鳞状细胞癌的重要靶标，因此及时发现其在唾液中的浓度改变有助于准确预测口腔鳞状细胞患者的发病、转移及预后状态。使用一种能够探测到CSTB在口腔唾液内的浓度变化是一种口腔癌发生或复发早期检测的有效方法，有利于临床医生的诊断与治疗。

但CSTB本身唾液浓度较低，不易通过检测发觉。目前常用方法，包括了酶联免疫吸附试验、酶放大镧系元素发光、放射免疫分析法、免疫聚合酶链式反应分析法、基质辅助激光解吸法和选择性反应监测质谱法等方法，这些对于CSTB蛋白的浓度检测范围及检测变化区间均有限，无法灵敏、特异性地检测出其浓度减低。

发明内容

本发明针对在现有CSTB本身唾液检测方法浓度检测范围及检测变化区间均有限，无法灵敏、特异性地检测出其浓度减低的技术问题，提供一种可灵敏、特异性地检测出CSTB浓度减低的半胱氨酸蛋白酶抑制剂B的检测装置及其制备方法和应用。

为此，本发明提供一种半胱氨酸蛋白酶抑制剂B检测装置，所述半胱氨酸蛋白酶抑制剂B检测装置为聚对苯二甲酸乙二酯膜，所述聚对苯二甲酸乙二酯膜设有非对称纳米孔，所述非对称纳米孔为不对称而连续的锥形。

优选的，所述非对称纳米孔设有大口端和小口端，所述大口端的直径为400nm-650nm，所述小口端的直径为5nm-35nm。

本发明同时提供一种半胱氨酸蛋白酶抑制剂B检测装置的制备方法，包括如下步骤：(1)使用重离子轰击聚对苯二甲酸乙二酯膜，形成轰击轨道；(2)用紫外灯辐照所述步骤(1)得到的重离子轰击后的聚对苯二甲酸乙二酯膜；(3)将所述(2)得到的聚对苯二甲酸乙二酯膜进行非对称光纳米孔刻蚀，得到非对称纳米通道膜；(4)在室温下，用N-(3-二甲氨基丙基)-N’-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基磺酰基琥珀酰亚胺钠盐的水溶液浸泡所述步骤(3)得到的膜，使膜上的羧基被激活；(5)蒸馏水冲洗所述步骤(4)得到的膜，浸泡在半胱氨酸蛋白酶抑制剂B单克隆抗体的水溶液中，使抗体反应并最终将抗体固定在膜内表面，即为半胱氨酸蛋白酶抑制剂B的检测装置；

优选的，所述步骤(3)中，刻蚀所用刻蚀液为氢氧化钠溶液，阻止液为甲酸和氯化钾。

优选的，所述步骤(3)中，将膜夹持在刻蚀装置中，在膜的正极一侧加入所述刻蚀液，负极一侧加入所述阻止液，监测电流变化，然后将正极一侧的刻蚀液吸出并用阻止液清洗，最后加入新的阻止液，得到非对称纳米通道膜。

本发明还提供一种半胱氨酸蛋白酶抑制剂B检测装置在制备口腔鳞状细胞癌检测设备中的应用。