[发明专利]一种利用高效液相电感耦合等离子体质谱测定硒形态的方法

说明书

本发明公开了一种利用高效液相电感耦合等离子体质谱测定硒形态的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：(1)流动相制备；(2)采用高效液相色谱‑电感耦合等离子体质谱联用对标准硒形态溶液和待测提取提取液进行测定；(3)采用归一化法对样品中硒代胱氨酸、硒代蛋氨酸、甲基硒代半胱氨酸、亚硒酸根以及硒酸根五种硒形态进行定量分析。采用本方法检测植物硒形态，形态分离完全，流动相配制方便，定量分析得出的结果准确可靠，能科学分析植物中硒代胱氨酸(SeCys₂)、硒代蛋氨酸(SeMet)、甲基硒代半胱氨酸(MeSeCys)、亚硒酸根(SeO₃^2‑)以及硒酸根(SeO₄^2‑)五种硒形态。

技术领域

本发明涉及一种利用高效液相电感耦合等离子体质谱测定硒形态的方法，属于分析测试领域。

背景技术

目前的研究发现硒在环境介质中主要以SeO₃^2-、SeO₄^2-、Se⁰、Se^2-的形式存在；而硒在农作物中主要以SeMet、SeCysCysSe、MeSeCys、SeO₃^2-、SeO₄^2-等形式存在，一般通过LC-AFS、HPLC-ICP-MS等方法予以分析。全国供销行业标准《富硒农产品GH/T1135-2017》中推荐的检测方法为LC-AFS，而低硒、含硒或天然富硒的农产品经样品前处理后往往达不到AFS的仪器检测限。

发明内容

有鉴于此，本发明的主要目的在于提供一种利用高效液相电感耦合等离子体质谱测定硒形态的方法，不仅仅是检测元素总量，同时优化了定量方法，排除实验干扰，提高检测效率与准确率。

为了实现上述目的，本发明提供了一种利用高效液相电感耦合等离子体质谱测定硒形态的方法，包括以下步骤：

(1)流动相制备：将铵盐溶液及色谱纯甲醇配制成甲醇-柠檬酸铵缓冲液并调节pH值；使用0.22μm滤膜对流动相进行抽滤，超声脱气，得到流动相；

(2)采用高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用(ICP-MS)对标准硒形态溶液和待测提取提取液进行测定；ICP-MS在分析检测硒形态时具有灵敏度高、选择性好等优点，以及具有多元素和同位素同时检测的能力,但是硒离子化效率相对较低，并且氩的二聚物Ar₂对检测硒存在着严重的离子干扰，因此采用CCT 碰撞池技术消除离子干扰；

(3)采用归一化法对样品中硒代胱氨酸(SeCys₂)、硒代蛋氨酸(SeMet)、甲基硒代半胱氨酸(MeSeCys)、亚硒酸根(SeO₃^2-)以及硒酸根(SeO₄^2-)五种硒形态进行定量分析。归一化法相较其他方法的优点是：简便、准确、定量结果与进样量重复性无关(在色谱柱不超载的范围内)、操作条件略有变化时对结果影响较小，并且可以对未知物质进行定量分析。

进一步地，其中步骤(1)中，所述铵盐选自柠檬酸二铵、磷酸氢二胺和柠檬酸铵中的一种，优选为柠檬酸铵。

进一步地，其中步骤(1)中，所述色谱纯甲醇为经过-20℃冷冻的色谱纯甲醇，以保证其物理及化学性质的稳定下最节省实验成本。

进一步地，其中步骤(1)中，所述流动相中甲醇的体积浓度为2-10％，优选为 2％，这样优选后有利于达到完全分离五种硒形态的效果。

进一步地，其中步骤(1)中，所述流动相中铵盐溶液的浓度为2-10mmol/L，优选为6mmol/L，这样优选后有利于达到完全分离五种硒形态的效果。

进一步地，其中步骤(1)中，所述流动相的pH值为5-6，优选为5.7，这样优选后有利于达到完全分离五种硒形态的效果。