[发明专利]一种低硒高油脂植物硒形态测定的前处理方法

权利要求书

1.一种低硒高油脂植物中硒形态测定的前处理方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)样品酶解：将待测样品中依次加入蛋白酶XIV与脂肪酶，混合均匀，之后加入超纯水，水浴超声30-60min，振荡5-15h后静置；

(2)样品酶解液提取：向步骤(1)得到的产物中中加入氯仿，密封，振荡1-2min后，2500-3500rpm/min离心10-12min，吸取20-25％(v/v)的样品上清液，按照湿法消解-氢化物发生-原子荧光光谱法流程检测总硒；

(3)样品浓缩：吸取步骤(2)中的剩余上清液浓缩直至完全干燥，加入2-3mL超纯水使样品复溶；

(4)样品除杂：将步骤(2)复溶后的样品取2-3mL分三至四次进行洗脱，并将洗脱液混合，之后将该洗脱液浓缩至0.4-0.6mL；之后将其复溶、离心，进行后续的HPLC进样。

2.如权利要求1所述的前处理方法，其特征在于，在步骤(1)的样品酶解之前还包括样品干燥处理的步骤及样品称取的步骤。

3.如权利要求2所述的前处理方法，其特征在于，所述样品干燥处理步骤包括：将样品洗净，样品经过冷冻干燥，液氮保护环境中研磨，过100-200目筛。由于硒形态热稳定性较差，为了保证待测样品中各个形态不发生转变，采用冷冻干燥。为防止干燥后的样品在研磨中吸水变成粘稠装，采用液氮保护。

4.如权利要求2所述的前处理方法，其特征在于，所述样品称取步骤包括：称取待测样品于40-50mL玻璃瓶中，并在玻璃瓶上标注编号，在记录本上记录其编号和质量。

5.如权利要求4所述的前处理方法，其特征在于，所述待测样品的质量偏差控制在10％以内。

6.如权利要求1所述的前处理方法，其特征在于，步骤(1)中，所述蛋白酶XIV、脂肪酶与超纯水的质量比为(0.01-0.05)：(0.01-0.05):10；所述超纯水的电导率为18.2MΩ·cm；所述水浴的温度为35-40℃；所述振荡的温度为35-40℃，转速为250±20rpm/min。

7.如权利要求1所述的前处理方法，其特征在于，步骤(1)中，所述超声时间为45±5min，振荡时间为5-6h。

8.如权利要求1所述的前处理方法，其特征在于，步骤(2)中，所述氯仿与步骤(1)得到的产物的体积比为1:1.2。

9.如权利要求1所述的前处理方法，其特征在于，步骤(3)中，所述浓缩的冷阱温度为-105℃，所述浓缩温度为-3℃--4℃。

10.如权利要求1所述的前处理方法，其特征在于，步骤(4)中，所述离心机的温度为3-4℃，转速为10000-12000r/min，离心时间为20±5min；所述洗脱是采用-20℃冰冻的无水甲醇激活的Sep-Pak C18一次性小柱进行的。