[发明专利]一种低硒高油脂植物硒形态测定的前处理方法

说明书

本发明公开了一种低硒高油脂植物中硒元素形态测定的前处理方法，包括以下步骤：样品称取；样品酶解；样品酶解液提取，测总硒；样品浓缩；样品除杂。本发明所述的前处理方法，操作简单快捷，形态分离完全。

技术领域

本发明涉及一种低硒高油脂植物硒形态测定的前处理方法，属于分析测试领域。

背景技术

由于植物中硒形态多样化并且各个硒形态含量较低，大部分硒代氨基酸还具有热不稳定性，因此在分析硒形态的过程中前处理方法既要考虑方法回收率，也要保证方法的重现性及稳定性。当待测目标物为硒蛋白、硒多糖等大分子含硒化合物时，通常利用液相萃取的方式将不同含硒化合物提取之后，再进行总硒检测，例如有现有技术利用适量水、70％乙醇溶液、0.1mol/L NaCl溶液、0.1mol/L HCl溶液和0.1mol/L NaOH溶液分别提取富硒花生中水溶蛋白、醇溶蛋白、盐溶蛋白、酸溶蛋白及碱溶蛋白，进而测得这些蛋白质结合态的硒含量。而这些现有方法的时间成本很大，可能造成样品形态不稳定，也容易受到其余离子干扰。

发明内容

有鉴于此，本发明的主要目的在于提供一种低硒高油脂植物硒形态测定的前处理方法。

为了实现上述目的，本发明提供了一种低硒高油脂植物硒形态测定的前处理方法，包括以下步骤：

(1)样品酶解：将待测样品中依次加入蛋白酶XIV与脂肪酶，混合均匀，之后加入超纯水，水浴超声30-60min，振荡5-15h后静置；

(2)样品酶解液提取：向步骤(1)得到的产物中中加入氯仿，密封，振荡1-2min后，2500-3500rpm/min离心10-12min，吸取20-25％(v/v)的样品上清液，按照湿法消解-氢化物发生-原子荧光光谱法流程检测总硒；

(3)样品浓缩：吸取步骤(2)中的剩余上清液浓缩直至完全干燥，加入2-3mL超纯水使样品复溶；

(4)样品除杂：将步骤(2)复溶后的样品取2-3mL分三至四次进行洗脱，并将洗脱液混合，之后将该洗脱液浓缩至0.4-0.6mL；之后将其复溶、离心，进行后续的HPLC进样。

优选地，其中在步骤(1)的样品酶解之前还包括样品称取的步骤。

优选地，其中所述样品称取步骤包括：称取待测样品于40-50mL玻璃瓶中，并在玻璃瓶上标注编号，在记录本上记录其编号和质量。

优选地，其中所述待测样品的质量偏差控制在10％以内。

优选地，其中步骤(1)中，所述蛋白酶XIV、脂肪酶与超纯水的质量比为(0.01-0.05)：(0.01-0.05):10，优选为0.01:0.01:10，这样优选后可以在不影响实验结果的条件下最大程度上节省成本；所述超纯水的电导率为18.2MΩ·cm。

优选地，其中步骤(1)中，所述水浴的温度为35-40℃，优选为37℃；所述振荡的温度为35-40℃，优选为37℃，转速为250±20rpm/min，优选为250rpm/min，这样优选后可以免样品形态发生改变。

优选地，其中步骤(1)中，所述超声时间为45±5min，振荡时间为5-6h，这样可以在不影响实验结果的条件下最大程度地减少实验时间。

优选地，其中步骤(2)中，所述氯仿与步骤(1)得到的产物的体积比为1:1.2。

优选地，其中步骤(3)中，所述浓缩的冷阱温度为-105℃(冷阱的作用是把样品冷冻升华的水和甲醇冻住，防止回流)，所述浓缩温度为-3℃--4℃。

优选地，其中步骤(4)中，所述离心机的温度为3-4℃，优选为4℃，转速为10000-12000r/min，优选为10000r/min，离心时间为20±5min，离心时间为20min，这样优选后可以使样品完全离心。