[发明专利]一种酶及其制备方法和应用

权利要求书

1.酶，其特征在于，具有降解真菌毒素功能；

所述酶具有：

(Ⅰ)、如SEQ ID No.1或2所示的氨基酸序列；或

(Ⅱ)、如(Ⅰ)所述的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或两个氨基酸残基获得的氨基酸序列，且与(Ⅰ)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列；或

(III)、与(Ⅰ)或(Ⅱ)所述序列具有至少90％序列一致性，优选95％序列一致性，且与(Ⅰ)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列。

2.如权利要求1所述的酶在真菌毒素生物脱毒中的应用。

3.编码如权利要求1所述酶的核苷酸，其特征在于，具有：

(Ⅰ)、如SEQ ID No.3或4所示的核苷酸序列；或

(Ⅱ)、如SEQ ID No.3或4所示的核苷酸序列的互补核苷酸序列；或

(Ⅲ)、与(Ⅰ)或(Ⅱ)的核苷酸序列编码相同蛋白质，但因遗传密码的简并性而与(Ⅰ)或(Ⅱ)的核苷酸序列不同的核苷酸序列；或

(Ⅳ)、与(Ⅰ)、(Ⅱ)或(Ⅲ)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或两个核苷酸序列获得的核苷酸序列，且与(Ⅰ)、(Ⅱ)或(Ⅲ)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或

(V)、与(Ⅰ)、(Ⅱ)、(Ⅲ)或(Ⅳ)所述核苷酸序列具有至少90％序列一致性的核苷酸序列，优选95％序列一致性的核苷酸序列。

4.一种制备如权利要求1所述酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、称取10g大豆种皮或粉碎的大豆溶于200mL pH 7.0的磷酸盐缓冲液中，37℃下180r/min震荡提取1～4h，离心取上清液，在冰水浴中缓慢加入硫酸铵粉末至60～80％饱和度，4℃层析柜中静置过夜，离心取析出的蛋白质沉淀，溶解于10mM Tris-HCl中得粗酶液；

步骤2、先用强阴离子交换层析柱ENrichTM Q对步骤1制备的粗酶液进行层析得到不同组分的蛋白，不同组分的蛋白分别与真菌毒素反应验证其对毒素的降解活性，将对真菌毒素有降解活性的蛋白组分再进行分子筛ENrich TM SEC 70层析得到不同组分的蛋白，不同组分的蛋白再分别与真菌毒素反应验证其对毒素的降解活性，再将分子筛层析后对真菌毒素有降解活性的蛋白进行SDS-PAGE电泳确定蛋白纯度，获得酶；

步骤3、质谱鉴定。

5.如权利要求1所述的酶或如权利要求4所述方法制得的酶偶联葡萄糖氧化酶GOD和葡萄糖在真菌毒素脱毒上的应用。

6.一种复合酶，其特征在于，将如权利要求1所述的酶或如权利要求4所述方法制得的酶与葡萄糖氧化酶GOD、葡萄糖、淀粉和三氧化二铁按20～40：10～20：10～20：10～25：5～10比例混合。

7.一种真菌毒素生物降解剂，其特征在于，包括如权利要求1所述的酶、如权利要求4所述方法制得的酶或如权利要求6所述的复合酶，以及生理上可接受的配伍载体。

8.根据权利要求7所述的真菌毒素生物降解剂，其特征在于，所述生理上可接受的配伍载体包括但不限于稻壳、米糠、麦芽糖糊精、环糊精、麦麸、淀粉、膨润土、寡糖或酵母细胞壁中的一种或多种。

9.如权利要求6所述的复合酶或如权利要求7～8任一项所述的真菌毒素生物降解剂在真菌毒素脱毒中的应用。

10.如权利要求2、权利要求5或权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的真菌毒素包括但不限于玉米赤霉烯酮、玉米赤霉烯醇、玉米赤霉醇、黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2、黄曲霉毒素M1、黄曲霉毒素M2、交链孢毒素、呕吐毒素、T-2毒素、赭曲霉毒素、烟曲霉毒素、展青霉素、杂色曲霉素，优选为玉米赤霉烯酮、玉米赤霉烯醇、玉米赤霉醇、黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素M1或交链孢毒素。