[发明专利]CTC阴性富集法联合imFISH检测技术质控样品的制备方法在审
申请号: | 202110035078.7 | 申请日: | 2021-01-12 |
公开(公告)号: | CN112881647A | 公开(公告)日: | 2021-06-01 |
发明(设计)人: | 何惠端 | 申请(专利权)人: | 何惠端 |
主分类号: | G01N33/24 | 分类号: | G01N33/24 |
代理公司: | 广东品安律师事务所 44420 | 代理人: | 刘井 |
地址: | 363000 福建省漳*** | 国省代码: | 福建;35 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | ctc 阴性 富集 联合 imfish 检测 技术 样品 制备 方法 | ||
1.CTC阴性富集法联合imFISH检测技术质控样品的制备方法,其特征在于包括以下步骤:留取肿瘤细胞,经胰酶消化后利用甲醇-乙酸固定液进行梯度固定。
2.根据权利要求1所述的CTC阴性富集法联合imFISH检测技术质控样品的制备方法,其特征在于,所述肿瘤细胞是经细胞培养获得的。
3.根据权利要求1所述的CTC阴性富集法联合imFISH检测技术质控样品的制备方法,其特征在于,所述肿瘤细胞是活体肿瘤经切除破碎获得的。
4.根据权利要求1所述的CTC阴性富集法联合imFISH检测技术质控样品的制备方法,其特征在于,所述肿瘤细胞是单个肿瘤细胞或肿瘤细胞团。
5.根据权利要求1所述的CTC阴性富集法联合imFISH检测技术质控样品的制备方法,其特征在于,所述胰酶消化的时长为3~5min,待肿瘤细胞呈漂浮状时,加入封闭血清终止消化。
6.根据权利要求1所述的CTC阴性富集法联合imFISH检测技术质控样品的制备方法,其特征在于,在所述梯度固定的过程中,每次均包括以下步骤:向肿瘤细胞中加入其体积20~50倍的、含有甲醇乙酸混合液的工作液,混匀,静置10min后,800~2000r/r/min离心5~10min。
7.根据权利要求6所述的CTC阴性富集法联合imFISH检测技术质控样品的制备方法,其特征在于,在所述梯度固定的过程中,甲醇乙酸混合液在工作液中的占比依次为25%、50%、75%、100%;所述工作液中,除甲醇乙酸混合液之外,余量均为浓度0.9%的NaCl溶液。
8.根据权利要求1所述的CTC阴性富集法联合imFISH检测技术质控样品的制备方法,其特征在于,所述梯度固定完毕后,还包括以下步骤:将肿瘤细胞重悬于甲醇乙酸混合液中,利用甲醇乙酸混合液对其进行稀释,并进行细胞计数。
9.根据权利要求8所述的CTC阴性富集法联合imFISH检测技术质控样品的制备方法,其特征在于,待稀释至5-10个细胞或细胞团/μL时,停止稀释,置于不低于0℃的环境中保存。
10.根据权利要求1所述的CTC阴性富集法联合imFISH检测技术质控样品的制备方法,其特征在于,在胰酶消化后,不执行所述梯度固定步骤,而执行以下步骤:将肿瘤细胞与细胞冻存液混匀,置于不高于-70℃的环境中保存。
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