[发明专利]CTC阴性富集法联合imFISH检测技术质控样品的制备方法

说明书

本发明提供了CTC阴性富集法联合imFISH检测技术质控样品的制备方法，包括以下步骤：留取肿瘤细胞，经胰酶消化后利用甲醇‑乙酸固定液进行梯度固定。该方法制备的质控样品，可从CTC的富集至imFISH阶段做全程质控，可用于判断批次间检测技术的准确性；该质控样品为经过处理并固定DNA的培养肿瘤细胞，可长期保存于固定液中，而且在常温或冰箱冷藏保存即可，无需超低温冰箱保存活细胞。本发明解决了CTC阴性富集法联合imFISH检测技术中缺少临床实验室质控要求的问题，所制备的质控样品能够从富集细胞开始到imFISH最后的阅片阶段实现质量控制，有利于提高检测的准确性。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及CTC阴性富集法联合imFISH检测技术质控样品的制备方法。

背景技术

循环肿瘤细胞(CTC)的检测已被广泛应用于肿瘤疗效的快速评估、预后的判别及耐药与复发的即时性监测。免疫荧光原位杂交(imFISH)是在组织、细胞水平上对蛋白、DNA或RNA进行定性、定位和定量分析的实验技术，利用该技术对CTC进行鉴别与分类，可确定并分离出具有特殊临床意义的CTC。近年来CTC阴性富集法联合imFISH检测技术展现出了良好的前景。

质控样品对于确保方法的准确性具有重要作用。现有技术中，循环肿瘤细胞(CTC)阴性富集法+imFISH检测技术未有质控品及质控方法，因此该方法用于检测CTC的准确性难以判断。

发明内容

本发明旨在针对现有技术的技术缺陷，提供CTC阴性富集法联合imFISH检测技术质控样品的制备方法，以解决现有技术中缺乏此类质控品的技术问题。

为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：

CTC阴性富集法联合imFISH检测技术质控样品的制备方法，包括以下步骤：留取肿瘤细胞，经胰酶消化后利用甲醇-乙酸固定液进行梯度固定。

作为优选，所述肿瘤细胞是经细胞培养获得的。

作为优选，所述肿瘤细胞是活体肿瘤经切除破碎获得的。

作为优选，所述肿瘤细胞是单个肿瘤细胞或肿瘤细胞团。

作为优选，所述胰酶消化的时长为3～5min，待肿瘤细胞呈漂浮状时，加入封闭血清终止消化。

作为优选，在所述梯度固定的过程中，每次均包括以下步骤：向肿瘤细胞中加入其体积20～50倍的、含有甲醇乙酸混合液的工作液，混匀，静置10min后，800～2000r/min离心5～10min。

作为优选，在所述梯度固定的过程中，甲醇乙酸混合液在工作液中的占比依次为25％、50％、75％、100％；所述工作液中，除甲醇乙酸混合液之外，余量均为浓度0.9％的NaCl溶液。

作为优选，所述梯度固定完毕后，还包括以下步骤：将肿瘤细胞重悬于甲醇乙酸混合液中，利用甲醇乙酸混合液对其进行稀释，并进行细胞计数。

作为优选，待稀释至5-10个细胞或细胞团/μL时，停止稀释，置于不低于0℃的环境中保存。

作为优选，在胰酶消化后，不执行所述梯度固定步骤，而执行以下步骤：将肿瘤细胞与细胞冻存液混匀，置于不高于-70℃的环境中保存。

在以上技术方案中，质控细胞可为单个肿瘤细胞也可以是肿瘤细胞团。此外，培养的肿瘤细胞在酶消化后(或活体肿瘤切除破碎后的肿瘤细胞用酶处理后)可不经过甲醇-乙酸-NaCl梯度固定液固定，而是可直接计数后用细胞冻存液混匀，置超低温冰箱保存。