[发明专利]一种用于青海湖裸鲤肠道单细胞水平NKA蛋白染色的方法在审
| 申请号： | 202110039591.3 | 申请日： | 2021-01-13 |
| 公开（公告）号： | CN112858679A | 公开（公告）日： | 2021-05-28 |
| 发明（设计）人： | 么宗利;王菲;来琦芳;周凯;高鹏程;刘一萌;孙真 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院东海水产研究所 |
| 主分类号： | G01N33/573 | 分类号： | G01N33/573;G01N33/531 |
| 代理公司： | 上海泰能知识产权代理事务所(普通合伙) 31233 | 代理人： | 魏峯;黄志达 |
| 地址： | 200090 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 青海湖 肠道 单细胞 水平 nka 蛋白 染色 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种用于青海湖裸鲤肠道单细胞水平NKA蛋白染色的方法，包括：
(1)取青海湖裸鲤肠道新鲜组织，冲洗，然后放入含D-PBS缓冲液的离心管中离心，随后加入肠道组织消化酶混合液酶解消化，得到组织消化液；
(2)将步骤(1)得到的组织消化液过滤、离心、重悬，得到肠道单细胞悬液；
(3)将步骤(2)得到的肠道单细胞悬液滴加到载玻片上，待沉降吸走细胞悬液，随后固定、封闭肠道单细胞，分别加入NKA一抗、二抗染色，最后荧光显微镜拍照即可。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中的D-PBS缓冲液不包含钙离子、镁离子和酚红。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中的肠道组织消化酶混合液组成为：0.1-0.5mg/ml胶原酶Ⅰ、0.04-0.08mg/ml胶原酶Ⅱ和0.1-0.5mg/ml胶原酶Ⅳ，溶剂为D-PBS缓冲液。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中的酶解消化时间为15-30min。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)中的重悬采用预冷的D-PBS缓冲液，D-PBS缓冲液中还包含2％FBS。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(3)中的NKA一抗抗体稀释比为1:100，NKA二抗抗体稀释比为1:400。
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