[发明专利]一种利用氯化铁制备斑马鱼血栓模型的方法在审
| 申请号： | 202110043719.3 | 申请日： | 2021-01-13 |
| 公开（公告）号： | CN112715435A | 公开（公告）日： | 2021-04-30 |
| 发明（设计）人： | 叶繁全 | 申请（专利权）人： | 叶繁全 |
| 主分类号： | A01K61/10 | 分类号： | A01K61/10;A61K49/00 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 510000 广东省广州市广州*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 氯化铁 制备 斑马 血栓 模型 方法 | ||
1.一种利用氯化铁制备斑马鱼血栓模型的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)挑选发育正常的2dpf斑马鱼30条左右，移入用胚胎培养水配制的0.1-1.1％氯化铁溶液，置于培养箱内培养48h后，吸弃培养水，用邻联茴香胺染色液于6微孔板中避光染色15min；
2)移除染色液，用DMSO快速清洗3遍；
3)将斑马鱼转入新的6微孔板中，加入等体积DMSO；
4)将斑马鱼置于载玻片上，于显微镜下对斑马鱼进行拍照并保存；
5)利用Image-Pro Plus 6计算斑马鱼躯干部及血栓染色面积，(血栓染色面积/躯干面积)×100％作为血栓发生程度的指标；
其中，斑马鱼培养用水配方：5mmol/L NaCl，0.17mmol/L KCl，0.4mmol/L CaCl2，0.16mmol/L MgSO4；
其中，邻联茴香胺染色液配方：含0.6mg/mL邻联茴香胺，0.01mol/L醋酸钠，0.65％H2O2，0.16mmol/L MgSO4。
2.一种利用氯化铁制备斑马鱼血栓模型的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)挑选发育正常的2dpf斑马鱼30条左右，移入用胚胎培养水配制的0.7％氯化铁溶液，置于培养箱内培养48h后，吸弃培养水，用邻联茴香胺染色液于6微孔板中避光染色15min；
2)移除染色液，用DMSO快速清洗3遍；
3)将斑马鱼转入新的6微孔板中，加入等体积DMSO；
4)将斑马鱼置于载玻片上，于显微镜下对斑马鱼进行拍照并保存；
5)利用Image-Pro Plus 6计算斑马鱼躯干部及血栓染色面积，(血栓染色面积/躯干面积)×100％作为血栓发生程度的指标；
其中，斑马鱼培养用水配方：5mmol/L NaCl，0.17mmol/L KCl，0.4mmol/L CaCl2，0.16mmol/L MgSO4；
其中，邻联茴香胺染色液配方：含0.6mg/mL邻联茴香胺，0.01mol/L醋酸钠，0.65％H2O2，0.16mmol/L MgSO4。
3.如权利要求2所述的斑马鱼血栓模型的使用方法，包括以下步骤：
1)根据权利要求2的方法制备斑马鱼血栓动物模型；
2)加入待测药物，继续培养相应时间；
3)用邻联茴香胺染色液染色15min；
4)利用Image-Pro Plus 6计算斑马鱼躯干部及血栓染色面积，(血栓染色面积/躯干面积)×100％值作为评价药物对血栓的影响的指标。
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