[发明专利]一种绒山羊毛囊毛乳头细胞分离培养的方法

权利要求书

1.一种绒山羊毛囊毛乳头细胞的分离方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将采集的绒山羊颈背部皮肤冲洗干净，然后进行消毒处理，于显微镜下分离初级毛囊和次级毛囊；

（2）将步骤（1）所得的初级毛囊和次级毛囊分别置于浓度为0.1～1.0%的Ⅱ型胶原酶中消化处理10～15分钟，然后终止消化；

（3）于显微镜下切下初级毛囊毛球部，并将毛乳头分离出来；于显微镜下切下次级毛囊毛球部；

（4）将步骤（3）中所得到的初级毛囊毛乳头以及次级毛囊毛球部固定于培养皿中，加入含10%胎牛血清的DMEM培养液进行培养；

（5）在次级毛囊毛乳头细胞培养过程中，首先用10微升无酶枪头剔掉混杂的毛母质细胞，然后用含0.008% EDTA的0.1%胰蛋白酶于37℃细胞培养箱中消化4分钟，收集消化下来的毛乳头细胞进行传代培养；

步骤（1）所述分离初级毛囊和次级毛囊的具体操作为将消毒后的绒山羊皮肤沿毛囊生长方向切成细长薄片，从薄片中分离出初级毛囊和次级毛囊，并将毛球部周围组织剔除干净；

步骤（4）所述固定是用注射器针头将初级毛囊毛乳头或次级毛囊毛球部在细胞培养皿中划一下加以固定。

2.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，步骤（1）所述冲洗为使用预冷的生理盐水冲洗。

3.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，步骤（1）所述消毒处理为用75%酒精处理15秒。

4.根据权利要求1-3任一项所述的分离方法，其特征在于，步骤（2）所述消化处理中Ⅱ型胶原酶的浓度为0.2%。

5.根据权利要求4所述的分离方法，其特征在于，步骤（2）所述消化处理的条件为于37℃水浴锅中消化12分钟。

6.根据权利要求5所述的分离方法，其特征在于，步骤（2）所述终止消化为添加含10%胎牛血清的DMEM培养基。