[发明专利]一种麦麸阿拉伯木聚糖的荧光标记方法及其制备

说明书

本发明属于生物大分子荧光标记领域，特别涉及一种荧光标记阿拉伯木聚糖的方法。荧光标记阿拉伯木聚糖的方法主要包括两个步骤：(1)将阿拉伯木聚糖溶于PBS溶液中，在搅拌条件下依次加入酪胺和氰基硼氢化钠，冻干得到阿拉伯木聚糖‑酪胺复合物；(2)将复合物溶于蒸馏水中，加入异硫氰酸荧光素(FITC)，阿拉伯木聚糖即接上荧光基团。通过所述方法使不带有特殊基团的阿拉伯木聚糖转变为易于检测的带有荧光的多糖，并且所述标记方法对于阿拉伯木聚糖的结构无显著影响，对于研究阿拉伯木聚糖及其他多糖在食品加工、消化等过程中的定向追踪及药理活性机制等研究有一定参考价值。本发明的荧光标记阿拉伯木聚糖的方法具有反应条件温和、操作简单、稳定时间长等特点。

技术领域

本发明涉及一种荧光标记阿拉伯木聚糖的方法，属于生物大分子荧光标记领域。

背景技术

阿拉伯木聚糖是谷物中广泛存在的一种非淀粉多糖，具有独特的物理化学性质和营养价值，对谷物产品的加工和最终产品的品质都有较大影响。研究表明，阿拉伯木聚糖具有多种重要生理功能：作为膳食纤维，可润肠通便、减肥美容；作为免疫调节剂，可激活T/B淋巴细胞，增强人体免疫；此外，阿拉伯木聚糖还具有抗氧化、降低胆固醇以及调节血糖水平等生物活性。然而由于阿拉伯木聚糖本身缺少易于检测的发光基团，空间结构复杂等因素，这对阿拉伯木聚糖在食品加工、消化等过程中的定向追踪及药理活性机制等研究带来困难。

用荧光物质作为探针来标记蛋白和核酸，已经作为一种强有力的研究手段广泛用于组织学、细胞生物学、免疫学、药理学及临床医学等领域。荧光标记技术是一种非放射性的标记技术，它是通过将能发射荧光的物质共价连接或物理吸附到目标分子的某个基团上，通过检测荧光物质来实现对非荧光物质的定性和定量研究。本发明的出发点是提供一种荧光标记多糖的方法，解决多糖在分子内外检测、食品加工及药理活性机制等功能活性研究中定向追踪难、不可控等问题。

发明内容

针对阿拉伯木聚糖在食品加工、消化过程中的定向追踪难及药理功能研究不可控等问题，本发明的目的是提供一种具有反应条件温和、操作简单、稳定时间长等特点的阿拉伯木聚糖荧光标记方法。此外，本发明不仅可以实现对阿拉伯木聚糖在各种研究中的定向追踪，提高其溶解性并促进其功能活性发挥，而且对阿拉伯木聚糖结构影响较小。

本发明提供了一种荧光标记阿拉伯木聚糖的方法，该方法包括以下步骤：

(1)将阿拉伯木聚糖溶于0.1-0.3M PBS溶液中，依次加入3.5-4.0g酪胺和1.5-2.0g氰基硼氢化钠，混合物在25℃下连续搅拌反应3-5天；

(2)混合物中加入2倍体积的无水乙醇，在3500-4000r/min条件下离心15-20min。

(3)无水乙醇洗涤沉淀物数次以排除游离酪胺，并在蒸馏水中透析数天后，冻干得到阿拉伯木聚糖-酪胺复合物(AT)；

(4)将步骤(3)所得复合物溶于蒸馏水中，用1.0-1.5M碳酸氢钠调节溶液pH＞8，在25℃下加入异硫氰酸荧光素FITC(0、25、50、100mg)，避光反应过夜；

(5)用无水乙醇洗涤沉淀共轭物数次，并在蒸馏水中透析数天，冷冻干燥得到荧光标记阿拉伯木聚糖(ATF-0、ATF-1、ATF-2、ATF-3)。

在本发明的方法中，优选地，步骤(1)中，所述溶于0.1-0.3M PBS溶液，优选0.2MPBS溶液。

在本发明的方法中，优选地，步骤(1)中，所述加入3.5-4.0g酪胺，优选加入酪胺4.0g。

在本发明的方法中，优选地，步骤(2)中，所述在3500-4000r/min条件下离心，优选在4000r/min条件下离心。

在本发明的方法中，优选地，步骤(4)中，所述使用1.0-1.5M碳酸氢钠，优选使用1.0M碳酸氢钠。