[发明专利]用于外泌体检测的荧光共振能量转移磁传感器及制备方法

权利要求书

1.一种用于外泌体检测的荧光共振能量转移磁传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.向含 5-15mg/mL 的表面带羧基的超顺磁 Fe₃O₄纳米粒子的 PBS 缓冲液中加入

0.5-1.5mg PEI，振荡 1-2h 后磁分离，得到Fe@PEI；再加入含有 0.2-1μL 羧基量子点的硼

酸盐缓冲液，得到Fe@QD；

S2.向 50-70μM PAA 溶液中加入 100-150μM EDC 和 220-250μM NHS，活化 1-2h 后，

加入 5-15μM 适配体，37℃振荡 10-15h，得到 PAA-Apt；

S3.向 S1 中所得Fe@QD加入 PEI再修饰一层 PEI，磁分离后加入 S2 所得 PAA-Apt，振荡 30-50min 后磁分离弃去上清液，于 PBS 缓冲液中重悬，得到Fe@QD@Apt；

S4.向含 15-25μM 巯基-DNA 的醋酸盐缓冲液加入 5-15mM TCEP，25℃孵育 1-2h，再加

入 10-15nm 的金纳米粒子，室温反应 13-18h，逐滴加入醋酸盐缓冲液，然后加入 1-2M NaCl溶液，得到 Au-DNA；

S5.向 S3 所得Fe@QD@Apt悬浮液中加入 PBS 缓冲液，然后滴加 S4 所得 Au-DNA，在37℃下孵育 4-5h，用 PBS 缓冲液清洗，即得；

所述 S2 中 EDC、NHS 和适配体的体积比为 8-12:4-6:3-5；

所述 S3 中通过加入 0.5-1.5mg PEI 振荡 1-2h 后磁分离来修饰 PEI；

所述 S4 中巯基-DNA、TCEP、金纳米粒子、逐滴加入的醋酸盐缓冲液和 NaCl 溶液的体积比为 30-40:5-8:5500-6500:50-70:550-650，且所述S4中的DNA与适配体部分互不配对；

所述S5中Fe@QD@Ap悬浮液、PBS缓冲液和Au-DNA的体积比为1-3:10-20:1-3；

所述适配体为氨基化的CD63适配体或氨基化的EpCAM适配体；所述氨基化的CD63 适配体及与其配对的 DNA 的序列如下：Apt CD63 ：5'-CACCCCACCTCGCTCCCGTGACACTAATGCTA-3'；氨基化的SH-DNA CD63 ：5'-GAGCGAGGTGGGGTGTTTTTTTTT-3'；所述氨基化的EpCAM适配体及与其配对的 DNA 的序列如下：

Apt EpCAM：5'-CACTACAGAGGTTGCGTCTGTCCCACGTTGTCATGGGGGGTTGGCCTGTTT-3'；

SH-DNA EpCAM：5'-GCAACCTCTGTAATATTTTTTTTT-3'。

2.权利要求1所述的方法制备得到的用于外泌体检测的荧光共振能量转移磁传感器，其特征在于，包括带有荧光的Fe@QD@Apt和 DNA 修饰的金纳米粒子；所述带有荧光的Fe@QD@Apt和 DNA 修饰的金纳米粒子通过互补配对 DNA 与 Apt 组装在一起，带有荧光的Fe@QD@Apt的荧光发射峰处在 DNA 修饰的金纳米粒子的吸收峰内。