[发明专利]一种猪血木组织培养方法

说明书

本发明公开了一种猪血木组织培养方法。本发明以猪血木种子的下胚轴为外植体，成功地进行优良株系的猪血木优质种苗的组织培养和快速繁殖，生产出的猪血木种苗具有遗传稳定性高，出苗快，苗壮，种苗品质好、抗性强、生长良好等特点；具有很好的市场前景。

技术领域

本发明属于植物生物技术领域，具体涉及一种猪血木组织培养方法。

背景技术

猪血木(Euryodendron excelsum H.T.Chang)，山茶科猪血木属唯一物种，属于多年生木本植物，目前仅产于广东省阳春县八甲镇。猪血木是一种名贵的木材，也是一种优美的观赏的园林观赏苗木，由于人为干扰和生存环境遭到破坏已濒临灭绝，目前，仅广东省阳春县八甲镇有分布，数量不超过100株，于1992年就被列为国家二级保护濒危植物，1998年被国际植物保护协会(IUCN)列为极濒危物种(Critically Endangered)，2012年被列为国家极小种群野生植物，并被列入《野生动植物濒危物种国际贸易公约》(CITES)附录II的保护范畴而被禁止贸易。对猪血木进行种质资源保护和园林应用均需要大量的种苗。猪血木可以通过播种繁殖，但其自然结实率低、且胚常发育不全造成萌发率低。猪血木的圈枝繁殖数量也非常有限，因此通过常规的繁殖难以获得大量种苗。

发明内容

本发明的目的是提供一种猪血木组织培养方法。本发明以猪血木种子下胚轴为外植体，操作程序和培养基独特，具有繁殖效率高、种苗品质好等特点；只需有简单的植物组织培养设备即可进行。

本发明的猪血木组织培养方法，包括以下步骤：

a.取猪血木(Euryodendron excelsum H.T.Chang)发育良好的种子，经消毒处理后，接种到种子萌发培养基上培养；所述的种子萌发培养基，每升由以下成分组成：20-30g蔗糖、6g琼脂，余量为1/2MS培养基，pH 5.8-6.0；

b.待种子发芽长至苗高1-2厘米时，切取下胚轴接种到不定芽诱导培养基上进行不定芽的诱导；所述的不定芽诱导培养基，每升由以下成分组成：1-5mg激动素(KT)、20-30mL椰子汁、20-30g蔗糖、6g琼脂，余量为改良的MS培养基，pH 5.8-6.0；所述的改良的MS培养基是将MS培养基中的硝酸钾替换为990mg/L的硫酸钾；

c.将诱导出的不定芽切割成单芽或双芽后继代培养于增殖培养基进行不定芽的增殖培养；所述的增殖培养基，每升由以下成分组成：1-2mg 6-苄基嘌呤(6-BA)、5-15mL椰子汁、20-30g蔗糖、6g琼脂，余量为改良的MS培养基，pH 5.8-6.0；所述的改良的MS培养基是将MS培养基中的硝酸钾替换为990mg/L的硫酸钾；

d.将增殖培养获得的2-3厘米高的丛生芽切成单芽后，接种到壮苗培养基进行壮苗培养；所述的壮苗培养基，每升由以下成分组成：20-30g蔗糖、6g琼脂，余量为改良的MS培养基，pH 5.8-6.0；所述的改良的MS培养基是将MS培养基中的硝酸钾替换为990mg/L的硫酸钾；

e.将壮苗培养获得的高3-4厘米的试管苗，在自然光照温室条件下炼苗7-10天；然后取出试管苗，放入3-5mg/L吲哚丁酸(IBA)溶液中浸泡10-30分钟，然后移栽到生根基质中进行生根培养；

f.生根培养苗长至6-8厘米高时，进行定植栽培。

优选，所述的消毒处理具体为：将种子先在体积分数75％乙醇水溶液中浸泡10-30秒，再用质量分数0.1％升汞溶液消毒5-10分钟，无菌水冲洗4-5次。

优选，所述的步骤a-c中培养条件为：温度24-28℃，光照度1500-2000lx，光照12-16小时/天。

优选，所述的步骤d中培养条件为：温度24-28℃，光照度2000-2500lx，光照12-16小时/天。

优选，所述的步骤e的生根基质是将珍珠岩和蛭石以体积比1-3：1混合得到的。