[发明专利]复方氨基酸溶液中色氨酸杂质的检测方法

说明书

本发明提供一种复方氨基酸溶液中色氨酸杂质的检测方法，包括如下步骤：（1）将色氨酸对照品溶于溶剂中，得到色氨酸杂质对照品溶液，以溶剂为空白溶液，将空白溶剂注入液相色谱仪，直至基线平稳，再取对照品工作溶液注入液相色谱仪进行检测；（2）将样品溶于溶剂中，得到供试品溶液，将供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，用外标法对色氨酸单个杂质进行计算，并计算杂质总量。本发明公开了一种测定复方氨基酸溶液中色氨酸总杂的检测方法，对于一些特定的色氨酸降解杂质，本方法也能够准确检出，不会受到复方氨基酸中其他成分的干扰，并满足各杂质间的分离度符合色谱系统适用性的要求，样品处理简单、方便，测样结果准确可靠、灵敏度高。

技术领域

本发明涉及色氨酸杂质测定技术领域，尤其涉及一种复方氨基酸溶液中色氨酸杂质的检测方法。

背景技术

众所周知，氨基酸溶液颜色的改变主要由于色氨酸的降解。在复方氨基酸溶液中色氨酸降解导致溶液颜色变黄，因此对复方氨基酸中色氨酸杂质的研究与控制不可避免。

目前现有的分析方法多为控制色氨酸单杂或几个特定杂质检测的HPLC法，并不能全面客观反映溶液中的色氨酸总杂情况。为了能更客观反映复方氨基酸溶液中的色氨酸杂质，本发明试图建立一种新的HPLC方法。

本方法在用HPLC法检测所有色氨酸杂质的基础上，进行了目前公认的几种色氨酸特定杂质的检测，各杂质可被检出，且不受复方氨基酸中其他成分的影响，各杂质间分离度良好(大于1.5)，满足色谱系统适用性的要求。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中存在的不足，提供一种复方氨基酸溶液中色氨酸杂质的检测方法，建立更加全面、客观、高效地控制复方氨基酸溶液中色氨酸总杂的的检测方法。本发明采用的技术方案是：

一种复方氨基酸溶液中色氨酸杂质的检测方法，其中，包括如下步骤：

(1)将色氨酸对照品溶于溶剂中，得到色氨酸杂质对照品溶液，以溶剂为空白溶液，将空白溶剂注入液相色谱仪，直至基线平稳，再取色氨酸杂质对照品溶液注入液相色谱仪进行检测；

(2)将样品溶于溶剂中，得到供试品溶液，将供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，用外标法对色氨酸单个杂质进行计算，并计算杂质总量。

优选的是，所述的复方氨基酸溶液中色氨酸杂质的检测方法，其中，所述流动相流速为1.0～1.4ml/min，进样量：20～25μl，柱温：30℃～35℃，采用流动相A和流动相B进行梯度洗脱，采用紫外检测器进行检测，检测波长为270nm。

优选的是，所述的复方氨基酸溶液中色氨酸杂质的检测方法，其中，所述流动相A为0.1％～0.2％甲酸的水溶液，流动相B为0.1％～0.15％甲酸的乙腈溶液。

优选的是，所述的复方氨基酸溶液中色氨酸杂质的检测方法，其中，所述甲酸为分析纯，乙腈为色谱纯，水为电阻率18.6Ω的超纯水。

优选的是，所述的复方氨基酸溶液中色氨酸杂质的检测方法，其中，所述梯度洗脱过程如下：

优选的是，所述的复方氨基酸溶液中色氨酸杂质的检测方法，其中，所述色氨酸杂质对照品溶液的浓度为0.13～0.16μg/ml。

色氨酸对照品溶液的配制：

a1.色氨酸对照品贮备液的配制(285μg/ml)：称取色氨酸对照约47.5mg至25ml容量瓶中，乙腈：0.1M HCl＝3:7(v/v)稀释至刻度，精密量取3ml至20ml量瓶，水稀释至刻度，摇匀；

A2.色氨酸杂质对照品溶液的配制(0.1425μg/ml)：精密量取色氨酸对照品贮备液1ml至50ml量瓶，水稀释至刻度；精密量取2.5ml至100ml量瓶，水稀释至刻度，摇匀。