[发明专利]高效转化鹅去氧胆酸的重组酵母底盘细胞改造及重组菌株构建与应用在审
| 申请号： | 202110057275.9 | 申请日： | 2021-01-15 |
| 公开（公告）号： | CN112725212A | 公开（公告）日： | 2021-04-30 |
| 发明（设计）人： | 徐国强;史劲松;高宇豪;许正宏;李会;龚劲松 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12N15/53;C12N15/60;C12N15/81;C12P33/02;C12R1/865 |
| 代理公司： | 无锡承果知识产权代理有限公司 32373 | 代理人： | 张婷婷 |
| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 高效 转化 鹅去氧 胆酸 重组 酵母 底盘 细胞 改造 菌株 构建 应用 | ||
1.一种高效转化鹅去氧胆酸合成熊去氧胆酸的重组酵母菌株，其特征在于：该重组酵母菌株是以突变型酵母菌株S.cerevisiae CEN.PK2-1C△pdc1△adh1为出发菌株，转入含有7α-HSDH和7β-HSDH基因的重组表达质粒获得的工程菌，其中突变型酵母菌株S.cerevisiae CEN.PK2-1C△pdc1△adh1是酵母菌株S.cerevisiae CEN.PK2-1C经基因敲除技术对酵母的基因PDC1和ADH1进行敲除后得到的，基因PDC1和ADH1核苷酸序列如SEQ IDNO:1和SEQ ID NO:2所示。
2.根据权利要求1所述的高效转化鹅去氧胆酸合成熊去氧胆酸的重组酵母菌株，其特征在于：所述7α-HSDH基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，所述7β-HSDH的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。
3.根据权利要求1所述的高效转化鹅去氧胆酸合成熊去氧胆酸的重组酵母菌株，其特征在于：敲除了乙醇合成途径的关键基因PDC1和ADH1，所述基因敲除技术为Cre-LoxP技术。
4.根据权利要求1所述的高效转化鹅去氧胆酸合成熊去氧胆酸的重组酵母菌株，其特征在于：所述重组酵母菌株名称为S.cerevisiae CEN.PK2-1C△pdc1△adh1 7α-HSDH↑7β-HSDH↑。
5.根据权利要求1-4任一所述的高效转化鹅去氧胆酸合成熊去氧胆酸的重组酵母菌株的构建方法，其特征在于：包括下列步骤：
(1)构建含有7α-HSDH和7β-HSDH基因的重组表达质粒：将7α-HSDH和7β-HSDH基因插入穿梭载体pY15TEF1和pYX212中，得到对应的重组表达质粒pY15TEF1-7α-HSDH和pYX212-7β-HSDH；
(2)将所述重组表达质粒转化入所述突变型酵母菌株S.cerevisiae CEN.PK2-1C△pdc1△adh1中。
6.根据权利要求5所述的高效转化熊去氧胆酸的重组酵母菌株的构建方法，其特征在于：重组酵母菌株所用培养基为YNB培养基。
7.如权利要求1-4任一所述的高效转化鹅去氧胆酸合成熊去氧胆酸的重组酵母菌株在生产熊去氧胆酸中的应用。
8.如权利要求7所述的应用生产所得的熊去氧胆酸。
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