[发明专利]一种南极大磷虾DNA条形码标准检测序列、引物及其应用

说明书

本发明涉及一种南极大磷虾DNA条形码标准检测序列、引物及其应用，属于分子生物学领域，所述序列为SEQ ID NO：1。本发明还提供了一对检测权利要求1所述述南极大磷虾DNA条形码标准检测序列的引物，以及南极大磷虾DNA条形码标准检测序列在鉴定南极大磷虾中的应用。利用所述引物对南极大磷虾DNA，得到的PCR扩增产物进行核苷酸序列测定，根据序列比对分析结果判别物种鉴定结果，如果与如序列表中SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列的遗传距离在0.02以下，即可判定待测样本为南极大磷虾。本发明方法能够能够将南极大磷虾与同属的其他磷虾加以区别。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体地涉及一种南极大磷虾DNA条形码标准检测序列、引物及其应用。

背景技术

南极大磷虾(Euphausia superba)俗称南极磷虾，隶属于节肢动物门(Arthropoda)、甲壳纲(Crustacea)、软甲亚纲(Malacostraca)、真虾总目(Eucarida)、磷虾目(Euphausiacea)、磷虾科(Euphausiidae)，磷虾属(Euphausia)，是一种生活在南大洋的甲壳类浮游动物。南极大磷虾是一种大型磷虾，成体会达到42-65mm长，未成体25-40mm。眼睛呈圆形，额角短而钝，伸至眼的中部左右。头胸甲有明显的颈窝。背甲下缘有一对侧齿，但在较老的雄体及部分雌性成体中侧齿退化或缺乏。腹节无背刺。雄性交接器顶突细长，弯曲，末端勾状。弯曲的基突伸至顶突的中部，末端呈不规则叶片状。侧突呈大勾状。大额须末节的长宽比至少为7。

从动物地理学上来说，南极大磷虾被列为南极的特有物种，仅围绕着南极大陆分布。但在环绕南极洲的太平洋、大西洋和印度洋的海域中南极磷虾分布的密度并不相同，密度最高的是在大西洋海域中，印度洋其次，太平洋分布密度最低。且分布在南极海域的磷虾种类在形态上相似，难以通过形态特征加以区分。目前，对南极大磷虾的物种识别仅局限于形态学鉴定，而能够鉴定的专业人员很少，这使得很多地区无法对南极大磷虾进行准确的鉴定。因此，开发出对南极大磷虾有效的鉴定方法就显得尤为重要。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于提供一段南极大磷虾DNA条形码标准检测序列及其在物种鉴定中的应用。本发明所提供的南极大磷虾DNA条形码标准检测序列有利于实现南极大磷虾的分子鉴定，能有效缩短鉴定时间。

本发明是通过如下技术方案来实现的：

南极大磷虾DNA条形码标准检测序列，如序列表中SEQ ID NO：1所示。

本发明还提供用于检测上述南极大磷虾DNA条形码标准检测序列的引物，包括正向引物5'-TTA TAC TTT ATT TTC GGT GCA TGA GC-3'和反向引物5'-AAA TGT TGG TAGAGA ATA GGG TCA-3'。

本发明还提供上述南极大磷虾DNA条形码标准检测序列在鉴定南极大磷虾中的应用。

具体的鉴定方法为：

1)从待测组织样本中分离提取DNA；

2)以步骤1)得到的DNA为模板，采用所述正向引物和反向引物，进行PCR扩增；

3)将步骤2)得到的PCR扩增产物进行核苷酸序列测定，根据序列比对分析结果判别物种鉴定结果，如果与如序列表中SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列的遗传距离在0.02以下，即可判定待测样本为南极大磷虾。

步骤2)所述正向引物为5'-TTA TAC TTT ATT TTC GGT GCA TGA GC-3'，反向引物为5'-AAA TGT TGG TAG AGA ATA GGG TCA-3'。

进一步的，步骤2)所述的PCR扩增反应的条件为：94℃预变性5min，94℃变性1min，41℃退火2min，72℃延伸3min，共进行40个循环，最后72℃再延伸10min。