[发明专利]一种高通用性的核酸检测方法及试剂盒

权利要求书

1.一种核酸检测体系，其特征在于包括分子连接单元和信号放大生成单元，所述分子连接单元是两条脱氧核糖核酸探针P1和P2；所述信号放大生成单元包括发夹探针H1和H2、氯化血红素、生色底物、终止液，所述发夹探针H1的序列为表一SEQ ID No.1所示序列，所述发夹探针H2的序列为表一SEQ ID No.2所示序列。

2.根据权利要求1所述的核酸检测体系，其特征在于分子连接单元可分为识别端和触发端，所述识别端的序列与目标核酸序列互补；所述触发端的序列能诱发所述信号放大生成单元发生放大反应；所述探针P1序列为表一SEQ ID No.3所示序列，所述探针P2序列为表一SEQ ID No.5所示序列。

3.根据权利要求1所述的核酸检测体系，其特征在于生成底物为3,3',5,5'-四甲基联苯胺和过氧化氢。

4.根据权利要求1所述的核酸检测体系，其特征在于所述终止液为H₂SO₄。

5.根据权利要求1~4所述的核酸检测体系，其特征在于所述探针P1和P2的浓度分别为25 nM，所述发夹探针H1和H2浓度为25 nM~125 nM，所述氯化血红素的浓度为50~250 nM，所述3,3',5,5'-四甲基联苯胺和过氧化氢浓度分别为0.025%和0.03%，所述H₂SO₄浓度为2 M。

6.一种核酸检测方法，其特征包括权利要求5所述的任一核酸检测体系，还包括如下步骤：

（1）所述探针P1和P2与所述发夹探针H1和H2分别退火处理；

（2）待测样本与经（1）处理的探针P1和P2结合后，加入经（1）处理的发夹探针H1和H2；

（3）将所述氯化血红素、3,3',5,5'-四甲基联苯胺和过氧化氢加入反应溶液；

（4）加入所述终止液，紫外分光光度计测定450 nm的吸光度。

7.根据权利要求6所述的核酸检测方法，其特征在于所述退火处理为置于95 ℃水浴下5 min，然后缓慢冷却至室温。

8.一种核酸检测试剂盒，其特征包括权利要求5所述的核酸检测体系。

9.根据权利要求8所述的核酸检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括第一容器，所述第一容器内含有所述探针P1和P2；

所述试剂盒还包括第二容器，所述第二容器内含有所述发夹探针H1；

所述试剂盒还包括第三容器，所述第三容器内含有所述发夹探针H2；

所述试剂盒还包括第四容器，所述第四容器内含有所述氯化血红素；

所述试剂盒还包括第五容器，所述第五容器内含有所述生色底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺和过氧化氢；

所述试剂盒还包括第六容器，所述第六容器内含有所述终止液H₂SO₄。

10.一种核酸检测试剂盒的使用方法，其特征包括权利要求9所述的核酸检测试剂盒，还包括如下步骤：

（1）取第一容器溶液20 μL加入待测溶液；

（2）所述第二容器和第三容器分别取溶液10 μL加入反应结束后的体系，室温反应40min；

（3）加入所述第四容器200 μL，室温反应30 min；

（4）加入所述第五容器100 μL，室温反应30 min；

（5）最后加入所述第六容器50 μL，紫外分光光度计下测定450 nm处的吸光度。