[发明专利]一种磷酸化EIF5B特异性抗体及其制备方法与应用有效
| 申请号： | 202110060553.6 | 申请日： | 2021-01-18 |
| 公开（公告）号： | CN112812187B | 公开（公告）日： | 2021-12-17 |
| 发明（设计）人： | 刘志礼;吴昕;刘家明 | 申请（专利权）人： | 南昌大学第一附属医院 |
| 主分类号： | C07K16/30 | 分类号： | C07K16/30;C07K16/06;A61K39/395;A61P35/00 |
| 代理公司： | 北京市盈科律师事务所 11344 | 代理人： | 罗东 |
| 地址： | 330000 *** | 国省代码： | 江西;36 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 磷酸化 eif5b 特异性 抗体 及其 制备 方法 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种磷酸化EIF5B特异性抗体，其特征在于，所述抗体为人源磷酸化ElF5B T78特异性位点多克隆抗体，所述磷酸化EIF5B特异性抗体通过如下方法制备：
制备抗原，根据EIF5B的蛋白序列，如SEQ ID NO:3所示，合成20mg多肽1，所述多肽1的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，并取10mg所述多肽1偶联血蓝蛋白，制得抗原；
制备抗体，将偶联有血蓝蛋白的多肽1作为抗原进行免疫处理，得到抗体：采用偶联有KLH的多肽1作为抗原免疫2只新西兰大白兔，免疫周期为20天，免疫完后7-10天取血，总共免疫4-5次；免疫处理后还包括抗血清效价检测的步骤，分别检测第三次、第四次免疫后的抗血清效价，若抗血清效价大于1：32000，则效价达到要求，若抗血清效价小于1：32000 ，则增加1-2次免疫；
抗体纯化，判断抗血清效价是否大于1:32000，若是，则收集含抗体血清，采用抗原特异亲和方式纯化，分别采用多肽1和多肽2制作纯化柱进行纯化，得到修饰性抗体以及去除非修饰性抗体，其中，纯化后的抗体效价大于1:64000；所述多肽2的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
2.根据权利要求1所述的磷酸化EIF5B特异性抗体，其特征在于，所述抗血清效价通过间接ELISA方法检测；所述抗体纯化通过抗原特异亲和纯化进行。
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