[发明专利]一种磷酸化EIF5B特异性抗体及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种磷酸化EIF5B特异性抗体及其制备方法与应用，所述抗体为人源磷酸化ElF5BT78特异性位点多克隆抗体，所述抗体一方面为检测磷酸化EIF5BT78位点的表达，验证相关分子机制提供了可能，另一方面该抗体与磷酸化真核翻译起始因子5B(p‑EIF5B)蛋白结合，还提供包含这种抗体的组合物，本发明利用现有的磷酸化蛋白抗体技术，构建特异性磷酸化EIF5BT78位点多克隆抗体，解决了现有技术中EIF5B磷酸化抗体种类少，特异性差等特点，为检测磷酸化EIF5BT78位点的表达、验证相关分子机制提供了可能。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地说涉及一种磷酸化EIF5B特异性抗体及其制备方法与应用。

背景技术

真核翻译起始因子5B(eukaryotic translation initiation factors,eIF5B)又名翻译起始因子IF-2，位于2号染色体上，其在翻译启动中发挥着重要作用。在P位点与启动子-tRNA和密码子配对，启动蛋白质翻译。同时，EIF5B也是特异性mRNA翻译所必需的，有助于支持或稳定Met-tRNA结合。早期的研究发现，EIF5B在CSFV(猪瘟病毒)和HCV(丙型肝炎病毒)依赖于IRES的翻译启动机制中，将Met-tRNA递送至核糖体的P位点以启动病毒的翻译。

EIF5B在多种肿瘤中高表达，且在癌症的病理生理学中，尤其是在癌症的增殖转移中起到决定性作用(Ross,J.A.,Dungen,K.V.,Bressler,K.R.et al.Eukaryoticinitiation factor 5B(eIF5B)provides a critical cell survival switch toglioblastoma cells via regulation of apoptosis.Cell Death Dis 10,57(2019).)。值得关注的是，在最近的研究中，EIF5B被证实在胶质母细胞瘤(GBM)细胞帽依赖性低氧反应蛋白翻译过程中作为关键分子发挥重要的作用(Ho,J.J.D.et al.Oxygen-sensitiveremodeling of central carbon metabolism by archaic eIF5B.Cell Rep.22,17–26(2018).)。也有研究表明，EIF5B在肝癌细胞中高表达，能够促进ASAP1对肝癌细胞的增殖和侵袭能力(Wang Zhen-Guang,Zheng Hao,Gao Wei et al.eIF5B increases ASAP1expression to promote HCC proliferation and invasion.Oncotarget,(2016))。目前在EIF5B和肿瘤相关性的研究中存在如下技术问题：现有EIF5B抗体种类较少、特异性差。

发明内容

为此，本发明所要解决的技术问题在于目前EIF5B抗体尤其是EIF5B磷酸化抗体种类少、特异性差的问题从而提出一种磷酸化EIF5B特异性抗体及其制备方法与应用。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案为：

本发明第一方面提供一种磷酸化EIF5B特异性抗体，所述抗体为人源磷酸化ElF5BT78特异性位点多克隆抗体。

本发明第二方面提供一种制备所述的磷酸化EIF5B特异性抗体的方法，其包括如下步骤：

制备抗原，合成多肽1，所述多肽1的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，并取部分所述多肽1偶联血蓝蛋白制得抗原；

制备抗体，将偶联有血蓝蛋白的多肽1作为抗原进行免疫处理，得到抗体；

抗体纯化。

作为优选，还包括制备用于抗体纯化的多肽2的步骤，所述多肽2的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。