[发明专利]用于检测GCK-MODY基因突变的方法及其试剂盒

权利要求书

1.用于确定GCK-MODY单基因遗传病进行GCK基因检测的DNA混合样本数目的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：

(1)确定人群中GCK-MODY单基因遗传病的发病率；以及

(2)根据以下公式计算混合的DNA样本数目：

-1/2+sqrt(1/4+1/a％)＜n1/2+sqrt(1/4+1/a％)

其中，a％为发病率，n为混合的样本数目，sqrt表示求平方根的函数。

2.用于在人群中扩增GCK-MODY单基因遗传病的GCK基因和/或在人群中检测GCK-MODY单基因遗传病的GCK基因突变的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：

(1)确定人群中GCK-MODY单基因遗传病的发病率；

(2)根据以下公式计算混合的DNA样本数目：

-1/2+sqrt(1/4+1/a％)＜n1/2+sqrt(1/4+1/a％)，

其中，a％为发病率，n为混合的样本数目，sqrt表示求平方根的函数；

(3)将第(2)步确定的DNA样本数目的样本混合；

(4)利用引物组对步骤(3)获得的DNA混合样本进行PCR反应，从而扩增出GCK-MODY单基因遗传病的GCK基因作为扩增产物，

所述方法为非诊断目的。

3.根据权利要求2的方法，其特征在于利用SEQ ID NO：1-22所示的核苷酸序列作为正向引物，以及SEQ ID NO：23-44所示的核苷酸序列作为反向引物；或利用SEQ ID NO：45-66所示的核苷酸序列作为正向引物，以及SEQ ID NO：67-88所示的核苷酸序列作为反向引物。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于所述方法还包括以下步骤：

(a)对第(4)步获得的扩增产物进行纯化；

(b)对步骤(a)获得的纯化产物构建文库；

(c)对步骤(b)获得的文库进行纯化；以及

(d)对步骤(c)获得的纯化文库进行测序。

5.根据权利要求4所述的方法，其中：所述测序为第二代测序。

6.根据权利要求4所述的方法，其中：采用磁珠进行纯化。

7.根据权利要求4所述的方法，其中：所述PCR反应的退火温度为58-64℃。

8.根据权利要求4所述的方法，其中：所述PCR反应的退火温度为60℃。

9.根据权利要求4所述的方法，其中：所述构建文库反应中的退火温度为58-64℃。

10.根据权利要求4所述的方法，其中：所述构建文库反应中的退火温度为60℃。

11.根据权利要求4所述的方法，其中：所述PCR反应进行32-37个循环。

12.根据权利要求4所述的方法，其中：所述PCR反应进行35个循环。

13.根据权利要求4所述的方法，其中：所述构建文库反应进行6-10个循环。

14.根据权利要求4所述的方法，其中：所述构建文库反应进行8个循环。

15.根据权利要求4所述的方法，其中：在测序之前还包括测定文库浓度的步骤和/或文库质检的步骤。