[发明专利]一种具有穿膜功能的Penetratin-hSOD1及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种具有穿膜功能的重组蛋白Penetratin-hSOD1的制备方法，其特征在于，首先以人细胞系的SOD1对应的cDNA为模板，通过PCR扩增得到Penetratin-hSOD1核酸片段，将该核酸片段同源重组到pET15b质粒，再将该质粒转化到大肠杆菌中进行诱导表达，破碎大肠杆菌后提取总蛋白，总蛋白经过纯化得到Penetratin-hSOD1。

2.根据权利要求1所述的Penetratin-hSOD1的制备方法，其特征在于，所述的人细胞系包括LO2、HK-2或者HaCaT；所述的大肠杆菌包括BL21(DE3)、Rosetta-gami(DE3)或者Transetta(DE3)，大肠杆菌经诱导处于感受态。

3.根据权利要求1所述的Penetratin-hSOD1的制备方法，其特征在于，所述的大肠杆菌的诱导表达温度为15-28℃，诱导时间为4-20h；诱导表达时，菌液OD600值为0.5-1.0，IPTG终浓度为0.2-1mM；所述的纯化是通过Ni-NTA柱进行Penetratin-hSOD1重组蛋白纯化。

4.根据权利要求1所述的Penetratin-hSOD1的制备方法，其特征在于，所述的PCR扩增条件为：

变性、退火和延伸进行20-40个循环，

最后延伸：72℃2-10min。

5.一种可穿膜重组蛋白Penetratin-hSOD1，其特征在于，其根据权利要求1-4任一所述的制备方法得到。

6.根据权利要求5所述的重组蛋白Penetratin-hSOD1，其特征在于，其氨基酸序列如下：

1 Arg Trp Phe Lys Ile Gln Met Gln Ile Arg Arg Trp Lys Asn Lys Lys Ala ThrLys

20 Ala Val Cys Val Leu Lys Gly Asp Gly Pro Val Gln Gly Ile Ile Asn PheGlu Gln

39 Lys Glu Ser Asn Gly Pro Val Lys Val Trp Gly Ser Ile Lys Gly Leu ThrGlu Gly

58 Leu His Gly Phe His Val His Glu Phe Gly Asp Asn Thr Ala Gly Cys ThrSer Ala

77 Gly Pro His Phe Asn Pro Leu Ser Arg Lys His Gly Gly Pro Lys Asp GluGlu Arg

96 His Val Gly Asp Leu Gly Asn Val Thr Ala Asp Lys Asp Gly Val Ala AspVal Ser

115 Ile Glu Asp Ser Val Ile Ser Leu Ser Gly Asp His Cys Ile Ile Gly ArgThr Leu

134 Val Val His Glu Lys Ala Asp Asp Leu Gly Lys Gly Gly Asn Glu Glu SerThr Lys

153 Thr Gly Asn Ala Gly Ser Arg Leu Ala Cys Gly Val Ile Gly Ile Ala Gln。

7.一种穿膜肽Penetratin在制备可穿膜重组蛋白Penetratin-hSOD1中的应用。

8.一种如权利要求5或6所述的可穿膜重组蛋白Penetratin-hSOD1在制备抗氧化药物中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的抗氧化药物含有如权利要求6或7所述的重组蛋白Penetratin-hSOD1。

10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的抗氧化药物含有一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂，所述的赋形剂包括稀释剂、湿润剂、润滑剂、填充剂和防腐剂中的一种或多种；所述的抗氧化药物的剂型包括胶囊、丸剂、片剂、口服液、颗粒剂、酊剂的剂型，及注射液。