[发明专利]EB病毒NA1-IgA抗体酶联免疫检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种EB病毒NA1-IgA抗体酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：包括酶结合物、样品稀释液、阴性对照液、质控血清液、底物A液、底物B液、终止液、浓缩洗涤液，以及包被板；

所述包被板上包被有EB病毒NA1重组抗原；

所述酶结合物为辣根过氧化物酶标记的抗人IgA；

所述酶结合物为采用过碘酸钠法，利用过氧化物酶进行标记得到的酶标记抗人IgA，所述酶标记抗人IgA的使用浓度定为1:20000；

所述EB病毒NA1重组抗原采用以下方法制备：选择EB病毒NA1蛋白的后237个氨基酸部分作为靶抗原，以EB病毒NA1相应的mRNA序列为模板，通过RT-PCR获得目的基因片段，然后转入pGEX-2T基因融合表达系统，经酶切测序鉴定后，将重组菌落用IPTG诱导表达，表达产物经GST亲和层析纯化，用凝血酶切去GST部分，最终得到所述EB病毒NA1重组抗原；

所述包被板上包被EB病毒NA1重组抗原的制备方法为：

（1）包被：将EB病毒NA1重组抗原用包被缓冲液稀释后，按95～105μL/孔包被到包被板的孔内，在18～28℃下温育吸附18～24小时；

（2）封闭：弃去包被液，洗板后用封闭液按145～155μL/孔在2～8℃下温育封闭18～22小时；

（3）干燥及保存：弃去封闭液，经30～37℃干燥处理4小时以上后，密封保存。

2.根据权利要求1所述的EB病毒NA1-IgA抗体酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：所述EB病毒NA1重组抗原的分子量为33～35kD、纯度≥90%。

3.根据权利要求1所述的EB病毒NA1-IgA抗体酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：所述封闭液为含5wt%蔗糖、2wt%液体明胶、0.25wt%干酪素钠、0.1wt%ProClin300的0.07mol/L硼酸-硼砂缓冲液；

步骤（2）中，所述洗板是用10mmol/L的浓缩洗涤液按300μL/孔洗板。

4.根据权利要求1所述的EB病毒NA1-IgA抗体酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：所述样品稀释液为含蛋白稳定剂和防腐剂的溶液；

所述浓缩洗涤液为含有Tween-20的PBS缓冲液；

所述底物A液为含过氧化脲溶液；

所述底物B液为含TMB的溶液；

所述终止液为1molL硫酸溶液；

所述阴性对照液为A值小于0.12的EB病毒NA1-IgA抗体阴性人血清；

所述质控血清液为己灭活的A值范围为0.6-2.2的EB病毒NA1-lgA抗体阳性人血清。