[发明专利]基于提取硫化一体机的游离DNA提取硫化方法及试剂盒

权利要求书

1.一种基于提取硫化一体机的游离DNA提取硫化试剂盒，包括提取试剂组分、硫化试剂组分和纯化试剂组分；其特征在于：

所述的提取试剂组分包括裂解液、提取漂洗液；

所述的硫化试剂组分包括转化液、结合液和DNA保护液；

所述的纯化试剂组分由洗涤液、磁珠、纯化漂洗液和洗脱缓冲液组成；

所述的转化液由重亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、四乙基氯化铵和尿素中的一种或多种组成；所述的结合液由胍盐、Tris-HCl和结合增强剂中的一种或多种组成；所述的DNA保护液由对苯二酚、6-羟基-2,5,7,8-四甲基苯并二氢吡喃-2-羧酸、NaF、四氢呋喃糠醇和咪唑烷基脲中的一种或多种组成；

其中，所述的结合增强剂为Carrier RNA或特异性的捕获序列中的一种或两种组成。

2.根据权利要求1所述的基于提取硫化一体机的游离DNA提取硫化试剂盒，其特征在于：所述的裂解液由蛋白变性剂、核酸保护剂、螯合剂和pH缓冲剂组成。

3.根据权利要求2所述的基于提取硫化一体机的游离DNA提取硫化试剂盒，其特征在于：所述的蛋白变性剂包括胍盐；所述的核酸保护剂由水溶性维生素、DTT、Carrier RNA和NaF中的一种或多种组成；所述的螯合剂由EDTA、EDTA-3K中的一种或多种组成；所述的pH缓冲剂由磷酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液和柠檬酸盐缓冲液中的一种或多种组成。

4.根据权利要求3中所述的基于提取硫化一体机的游离DNA提取硫化试剂盒，其特征在于：蛋白变性剂的胍盐为3M～4M的盐酸胍或者异硫氰酸胍；所述的核酸保护剂为5％～10％的水溶性维生素、5％DTT、0.01％～0.02％的NaF、1ug/mL的Carrier RNA中的一种或多种组成；所述的螯合剂包括5mM～50mM的EDTA、5mM～50mM的EDTA-K3中一种或多种；所述的pH缓冲剂为100mM的Tris-HCl(pH8.0)缓冲液。

5.根据权利要求1中所述的基于提取硫化一体机的游离DNA提取硫化试剂盒，其特征在于：所述的提取漂洗液由胍盐、Tris-HCl(pH8.0)和EDTA组成。

6.根据权利要求5中所述的基于提取硫化一体机的游离DNA提取硫化试剂盒，其特征在于：所述的提取漂洗液由终浓度为1M～2M的盐酸胍和/或异硫氰酸胍、10mM～50mM的Tris-HCl(pH8.0)、2mM～20mM的EDTA(pH8.0)组成。

7.根据权利要求1中所述的基于提取硫化一体机的游离DNA提取硫化试剂盒，其特征在于：所述的结合增强剂为浓度为1ug/mL Carrier RNA和100nmol/L的特异性捕获序列；所述特异性捕获序列位于目的基因片段的上游或者下游，且特异性捕获序列与目的基因片段的5’端间隔2bp～20bp，捕获序列片段大小为15bp～50bp，C碱基含量为10％～30％，Tm值在55℃～70℃之间。

8.根据权利要求1中所述的基于提取硫化一体机的游离DNA提取硫化试剂盒，其特征在于：所述的转化液由4M～7M的亚硫酸氢钠、亚硫酸氢铵、四乙基氯化铵和尿素中的一种或多种组成；结合液的胍盐由终浓度为1M～2M的盐酸胍或异硫氰酸胍中一种或两种组成；结合液的Tris-HCl为10mM～50mM的Tris-HCl(pH8.0)；所述的DNA保护液由5％～10％的对苯二酚、6-羟基-2,5,7,8-四甲基苯并二氢吡喃-2-羧酸、NaF、四氢呋喃糠醇和咪唑烷基脲的一种或多种组成；所述的洗涤液由75％～80％的乙醇组成；所述的磁珠粒径大小为300nm～800nm的硅羟基磁珠；所述的纯化漂洗液由10mM～50mM的Tris-Hcl(pH8.0)的70％～80％的乙醇组成；所述的洗脱缓冲液由10mM的Tris-HCl(pH8.0)和2mM的EDTA(pH8.0)组成。