[发明专利]一种产气荚膜梭菌噬菌体裂解酶及应用

说明书

本发明提供了一种产气荚膜梭菌噬菌体(Clostridiumperfringensphage)裂解酶及其作为抗菌物质在禽坏死性肠炎预防和食品污染控制中的应用，属于生物工程领域。本发明产气荚膜菌噬菌体裂解酶的氨基酸序列为SeqIDNO.2。利用生物工程技术开发能够高效杀灭产气荚膜梭菌的酶制剂，该制剂可以单独或复配使用，能够特异性的灭活产气荚膜梭菌，为目前防治禽坏死性肠炎和控制食品中产气荚膜梭菌污染提供一种安全、无毒副作用的酶制剂来源。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，尤其涉及一种产气荚膜梭菌噬菌体裂解酶及应用。

背景技术

产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens，Cp)是一种重要的人畜共患病原菌，不仅可以导致家禽的坏死性肠炎(NE)，给养殖业造成巨大的经济损失，还能够引起食物中毒，给人类健康带来巨大威胁。随着抗生素的广泛使用，产气荚膜梭菌对抗生素的耐药性不断增强，多重耐药现象明显，严重影响了抗生素的临床治疗效果。家禽是产气荚膜梭菌的主要宿主，其屠宰加工过程中往往会被产气荚膜梭菌污染，然而误食产气荚膜梭菌污染的食物能够引发食物中毒，可损伤细胞膜、血管内皮细胞并使糖类分解，导致细胞坏死、组织水肿、充气等病变，严重会导致死亡。

噬菌体是一类细菌依赖性的病毒，又称细菌病毒。裂解性噬菌体感染细菌后，可在宿主菌内快速增殖，并使之裂解，故又称毒性噬菌体。裂解酶是双链DNA噬菌体所特有的，是在感染宿主晚期由噬菌体表达的一类肽糖水解酶，该酶通过水解细菌细胞壁肽糖上糖与肽间的酰胺键或肽内氨基酸残基间的连键最终使宿主细胞裂解。裂解酶不仅特异性作用于宿主，且作用时间短，作用谱较噬菌体广。裂解酶具有高效、特异且不产生抗性等特点，目前在食品及医药行业已有成功应用的报道。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种产气荚膜梭菌噬菌体裂解酶及应用，该裂解酶能够特异性的灭活产气荚膜梭菌，防治禽坏死性肠炎和控制食品中产气荚膜梭菌污染。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

一种产气荚膜梭菌噬菌体(Clostridium perfringens phage)裂解酶，所述裂解酶氨基酸序列为Seq ID NO.2；核苷酸序列为Seq ID NO.1。

优选的是，扩增所述裂解酶核苷酸的引物为：5’-ATT GGA TCC ATG CTG CTG ATTAAC TGC-3’和5’-CTT AAG CTT TAA TTC AAC ACC TTT ATG TTT-3’。

一种含有产气荚膜梭菌噬菌体裂解酶核苷酸序列的质粒。

一种含有产气荚膜梭菌噬菌体裂解酶核苷酸序列的质粒的重组菌。

优选的是，所述重组菌的原核细胞表达载体为pET28a；裂解酶基因插入到pET28a的Bam H I和Hind III酶切位点之间；重组菌菌为DE3(pET-Cps-Z1)。

产气荚膜梭菌噬菌体裂解酶在制备防治禽坏死性肠炎药物的应用。

产气荚膜梭菌噬菌体裂解酶在抑制食品产气荚膜梭菌污染或过度生长的应用。

优选的是，所述食品为由肉类，或蛋类，或奶制品，或粮食，或蔬菜，或它们之间的组合加工的固体或液体类食品。

优选的是，将裂解酶与赋形剂复配后，用来抑制食品中产气荚膜梭菌的污染或过度生长。

相对于现有技术，本发明具有如下有益效果：

利用生物工程技术开发能够高效杀灭产气荚膜梭菌的酶制剂，该制剂可以单独或复配使用，能够特异性灭活产气荚膜梭菌，为目前防治禽坏死性肠炎及控制食品中产气荚膜梭菌污染提供一种安全、无毒副作用的酶制剂来源。

附图说明

图1：裂解酶Cps-Z1表达产物的鉴定分析；