[发明专利]一种快速检测牡蛎疱疹病毒OsHV-1的胶体金试纸条及其应用

权利要求书

1.一种快速检测牡蛎疱疹病毒OsHV-1的胶体金试纸条，其特征在于，所述胶体金试纸条以OsHV-1膜分子蛋白p21，如SEQ ID NO.1所示和p25，如SEQ ID NO.2所示作为待检抗原分子；

所述胶体金试纸条包括底板和吸附层；所述吸附层从加样端开始依次为样品垫、胶体金标记垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；其中，样品垫及胶体金标记垫由玻璃纤维棉制成；胶体金标记垫上吸附有胶体金标记的抗OsHV-1膜分子蛋白 p21和 p25蛋白的混合多克隆抗体mPcAb；硝酸纤维素膜上设有质控线C，以及检测线T；吸水垫由吸水滤纸制成；

所述OsHV-1膜分子蛋白 p21和 p25蛋白的混合多克隆抗体mPcAb具体制备方法如下：

（1）分别原核表达蛋白序列如SEQ ID NO.1所示的p21重组蛋白，及蛋白序列如SEQ IDNO.2所示的p25重组蛋白，经Ni离子柱和分子筛进行纯化；

（2）取上述重组p21和p25蛋白分别进行动物免疫；

（3）利用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化获得p21和p25各自对应的多克隆抗体IgG，p25与p21蛋白对应的抗体等体积混合后做为混合多克隆抗体mPcAb。

2.根据权利要求1所述的胶体金试纸条，其特征在于，所述动物免疫时每只兔的免疫剂量为800μg重组蛋白，免疫次数5次。

3.根据权利要求1所述的胶体金试纸条，其特征在于，所述多克隆抗体IgG的ELISA效价为1:10³~1:10⁶。

4.根据权利要求1所述的胶体金试纸条，其特征在于，所述质控线C含有羊抗或鼠抗兔IgG抗体；所述检测线T含有抗OsHV-1 p21和p25蛋白的混合多克隆抗体mPcAb。

5.一种如权利要求1-4任一项所述的胶体金试纸条在非诊断目的检测牡蛎疱疹病毒OsHV-1中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述胶体金试纸条的使用方法包括如下步骤：

（1）采集待检贝类外套膜样品，加入组织裂解液研磨或捣碎组织，得到待检溶液；

（2）将待检溶液滴入OsHV-1快速胶体金检测试纸条样品垫处，水平放置3~5min观察结果；

（3）若硝酸纤维素膜处质控线C和检测线T显现两条红棕色条带，表示待检样品中含有OsHV-1 p21蛋白或p25蛋白；若仅质控线C显现一条红棕色条带，表示待检样品中未检出OsHV-1 p21和p25蛋白抗原；若检测试纸条未显现任何条带表明检测操作不当或试纸条失效。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述组织裂解液包括0.1M Tris-HCl，0.5%Tween20，1.5% TritonX-100，0.03% NaN₃。