[发明专利]一种快速检测牡蛎疱疹病毒OsHV-1的胶体金试纸条及其应用

说明书

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种快速检测牡蛎疱疹病毒(Ostreidherpesvirus1,OsHV‑1)的胶体金试纸条方法及其应用。该胶体金试纸条以OsHV‑1膜分子蛋白p21，如SEQ ID NO.1所示和p25，如SEQ ID NO.2所示作为待检抗原分子。本发明快速检测试纸条特异性强、灵敏度高，待检样品制备简单。本发明胶体金检测试纸成本低，无复杂配套试剂，无需另外配置设备；专业或非专业人士均可短时上手操作。本发明快速检测试纸条方便携带及保存，检测时长短，适合现场快速OsHV‑1诊断，能够满足一线养殖户对OsHV‑1诊断的需求，具有广阔的市场应用场景。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种快速检测牡蛎疱疹病毒(Ostreidherpesvirus1 ,OsHV-1)的胶体金试纸条方法及其应用。

背景技术

国际病毒分类委员会 （International Committee on Taxonomy of Viruses,ICTV）2014年发布的病毒分类报告中，将双壳贝类牡蛎中发现的疱疹病毒样颗粒正式命名为牡蛎疱疹病毒（Ostreid Herpesvirus 1, OsHV-1）， 隶属疱疹病毒目（Herpesvirales），软体动物疱疹病毒科（Malacoherpesviridae）。19世纪70年代我国山东地区养殖扇贝大规模死亡与此类病毒感染直接相关，据法国海洋开发研究院报道，2008 年法国境内牡蛎养殖业因 OsHV-1 感染遭遇了毁灭性危机。法国科学家奎昆和米塔等率领团队，阐明了困扰牡蛎养殖产业几十余年夏季牡蛎死亡综合征正是由此类病毒感染诱发细菌二次感染造成。近些年贝类流行病学调查研究表明，我国蚶科养殖贝类正频繁遭受此类病毒侵袭，导致蚶科养殖群体大规模死亡。建立现场准确、快速的检测方法可有效监控此类病毒的流行情况，有效提示养殖户尽快采取应对措施，减少因此类病毒感染带来的经济损失。

目前对于OsHV-1的检测，均基于对病毒核酸水平的检测。利用C2/C6（5’CTCTTTACCATGAAGATACCCACC3’/5’ GTGCACGGCTTACCATTTTT 3’）引物进行普通PCR扩增检测或通过该引物对制备探针进行原位杂交检测；利用BF/B4（5’GTCGCATCTTTGGATTTAACAA 3’/5’ ACTGGGATCCGACTGACAAC 3’）引物进行荧光定量PCR检测。现有基于核酸水平检测方法灵敏度虽高，但假阳性率也高，并且对操作水平要求高，需要配套至少恒温水浴或金属浴设备，检测周期较长，现有方法均无法实现现场快速检测的目的，即便后期潜在待开发的基于LAMP等恒温扩增方法，同样存在假阳性率高，繁琐的核酸样品制备流程等问题。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明的主要目的在于提供一种现场方便、快捷、准确的检测牡蛎疱疹病毒OsHV-1胶体金试纸条。

本发明还提供了一种上述胶体金试纸条的应用。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

本发明提供了一种快速检测牡蛎疱疹病毒OsHV-1的胶体金试纸条，所述胶体金试纸条以OsHV-1膜分子蛋白p21，如SEQ ID NO.1所示和p25，如SEQ ID NO.2所示作为待检抗原分子。

本发明制备的胶体金试纸条包括底板和吸附层；所述吸附层从加样端开始依次为样品垫、胶体金标记垫、硝酸纤维素膜和吸水垫。其中，样品垫及胶体金标记垫由玻璃纤维棉制成；胶体金标记垫上吸附有胶体金标记的抗OsHV-1膜分子蛋白 p21和 p25蛋白的混合多克隆抗体mPcAb；硝酸纤维素膜上设有质控线C，以及检测线T；吸水垫由吸水滤纸制成。

进一步的，所述OsHV-1膜分子蛋白 p21和 p25蛋白的混合多克隆抗体mPcAb具体制备方法如下：

（1）分别原核表达蛋白序列如SEQ ID NO.1所示的p21重组蛋白，及蛋白序列如SEQID NO.2所示的p25重组蛋白，经Ni离子柱和分子筛进行纯化；