[发明专利]一种基于共价连接的已知分子与蛋白质相互作用检测系统及其鉴定或验证方法

权利要求书

1.一种基于共价连接的已知分子与蛋白质相互作用检测装置，其特征在于，所述检测装置包括以下分子：

a)链霉亲和素-短肽四聚体；

b)PafA酶；

c)生物素修饰的已知分子；

所述链霉亲和素-短肽四聚体中，短肽为含有12-100个氨基酸的肽链；所述短肽包括Pup分子或其突变分子，且所述Pup分子末端的谷氨酰胺突变为谷氨酸，其序列如SEQ IDNO.1所示；所述Pup的突变分子为存在一个或多个突变的Pup分子，序列如SEQ ID NO.2、SEQID NO.3、SEQ ID NO.4中的任一序列所示；

所述PafA酶表面的7个赖氨酸突变为精氨酸，突变位点为K162R，K202R，K320R，K361R，K423R，K435R和K446R；

所述生物素修饰的已知分子包括蛋白、DNA、RNA、小分子中的任一种或多种；

所述蛋白包括蛋白质、肽、修饰肽、抗体、凝集素中的至少一种；

所述RNA包括信使RNA、核糖体RNA、长链非编码RNA、非编码小RNA中的至少一种；

所述DNA包括双链DNA、闭环DNA中的至少一种；

所述小分子包括生物体中具有生物活性的寡核苷酸、氨基酸、维生素、动植物微生物的次级代谢产物以及化学合成的小分子中的至少一种。

2.一种根据权利要求1所述的检测装置用于鉴定已知分子与蛋白质相互作用的方法，其特征在于，包括以下步骤：

A、将生物素化的已知分子及待测样品充分混匀，并于25℃-35℃孵育0-1h；

B、在步骤A处理后的混合物中加入链霉亲和素-短肽四聚体，充分混匀并于25℃-35℃孵育0-1h；

C、在步骤B处理后的混合物中加入PafA酶，充分混匀并于25℃-35℃孵育1min-6h；

D、在步骤C处理后的混合物中加入生物素标记的亲和介质，分离出链霉亲和素-短肽及其连接的蛋白质；

E、质谱鉴定。

3.根据权利要求2所述的用于鉴定已知分子与蛋白质相互作用的方法，其特征在于，所述待测样品包括蛋白质，活细胞或组织，膜蛋白，细胞裂解液，组织裂解液中的至少一种。

4.一种根据权利要求1所述的检测装置用于验证已知分子与蛋白质相互作用的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、将待验证已知分子与待验证蛋白充分混匀，并于25℃-35℃孵育0-1h；

S2、在步骤S1处理后的混合物中加入链霉亲和素-短肽四聚体，充分混匀并于25℃-35℃孵育0-1h；

S3、在步骤S2处理后的混合物中加入PafA酶，充分混匀并于25℃-35℃孵育1min-6h；

S4、免疫印迹分析检测待验证已知分子与待验证蛋白的相互作用；所述待验证已知分子为生物素修饰的已知分子，包括蛋白、DNA、RNA、小分子中的任一种或多种；

所述蛋白包括蛋白质、多肽、修饰肽、抗体、凝集素中的至少一种；

所述RNA包括信使RNA、核糖体RNA、长链非编码RNA、非编码小RNA中的至少一种；

所述DNA包括双链DNA、闭环DNA中的至少一种；

所述小分子包括生物体中具有生物活性的寡核苷酸、氨基酸、维生素、动植物微生物的次级代谢产物以及化学合成的小分子中的至少一种。