[发明专利]一种用于扩增西瓜潜隐病毒的引物对及其应用

权利要求书

1.一种用于扩增西瓜潜隐病毒基因组片段的引物对，所述引物对由第一引物和第二引物组成；

所述第一引物的核酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述第二引物的核酸序列如SEQ IDNO.2所示。

2.一种用于扩增西瓜潜隐病毒基因组片段的试剂，所述试剂包括权利要求1所述的引物对。

3.如权利要求2所述的试剂，其特征在于，所述第一引物与所述第二引物的摩尔比为1:1；

所述试剂还包括反转录酶和/或DNA聚合酶；

所述试剂还包括阳性对照样品。

4.一种用于扩增西瓜潜隐病毒基因组片段的试剂盒，所述试剂盒中含有权利要求1所述的引物对或权利要求2或3所述的试剂。

5.权利要求1所述的引物对、权利要求2或3所述的试剂或权利要求4所述的试剂盒在如下a1或a2中的应用：

a1、检测西瓜潜隐病毒；

a2、制备检测西瓜潜隐病毒的制剂。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，a1是指：

检测待测植物材料是否感染西瓜潜隐病毒；或

检测待测病毒是否为西瓜潜隐病毒；

a2是指：

制备检测待测植物材料是否感染西瓜潜隐病毒的制剂；或

制备检测待测病毒是否为西瓜潜隐病毒的制剂。

7.一种检测待测植物材料是否感染西瓜潜隐病毒的方法，所述方法包括：

b1、采用权利要求1所述的引物对对所述待测植物材料的核酸进行PCR扩增；

b2、根据所述扩增的产物确定所述待测植物材料是否感染西瓜潜隐病毒。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述待测植物材料为西瓜叶片或西瓜种子。

9.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述待测植物材料的核酸为所述待测植物材料的总RNA。

10.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增为RT-PCR扩增。

11.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述确定的步骤为：表征所述PCR扩增产物中的DNA片段，当所述PCR扩增产物中没有588bp的DNA片段时，判定所述待测植物材料中没有感染所述西瓜潜隐病毒；当所述PCR扩增产物中含有588bp的DNA片段时，判定所述待测植物材料中感染了所述西瓜潜隐病毒；

所述表征是通过对所述扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳实现的；

所述PCR扩增采用的温度程序为：

(1)50℃反应30min；

(2)94℃反应2min；

(3)循环反应；

(4)72℃反应10min；

所述循环反应步骤为：94℃反应30s；55-56℃反应30s；72℃反应35s，循环30次。

12.一种检测待测病毒是否为西瓜潜隐病毒的方法，所述方法包括：

c1、采用权利要求1所述的引物对对所述待测病毒样本的核酸进行PCR扩增；

c2、根据所述扩增的产物判断所述待测病毒是否感染西瓜潜隐病毒。

13.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述待测病毒样本的核酸为所述待测病毒样本的总RNA。

14.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增为RT-PCR扩增。

15.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述确定的步骤为：表征所述扩增产物中的DNA片段，当所述扩增产物中没有588bp的DNA片段时，判定所述待测病毒样本不是所述西瓜潜隐病毒；当所述扩增产物中含有588bp的DNA片段时，判定所述待测病毒样本是所述西瓜潜隐病毒；

所述表征是通过对所述扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳实现的；

所述PCR扩增采用的温度程序为：

(1)50℃反应30min；

(2)94℃反应2min；

(3)循环反应；

(4)72℃反应10min；

所述循环反应步骤为：94℃反应30s；55-56℃反应30s；72℃反应35s，循环30次。