[发明专利]一种用于扩增西瓜潜隐病毒的引物对及其应用

说明书

本发明公开了一种用于扩增西瓜潜隐病毒基因组片段的引物对，包括第一引物和第二引物；第一引物的核酸序列如SEQ ID NO.1所示；第二引物的核酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明还公开了包括前述引物对的试剂与试剂盒及其应用。本发明还公开了使用前述引物对检测待测植物材料是否感染西瓜潜隐病毒的方法以及检测待测病毒是否为西瓜潜隐病毒的方法。前述引物对检测西瓜潜隐病毒的敏感性高，特异性好。

技术领域

本发明属于植物病毒技术领域，涉及生物检测技术，具体涉及基于一步法RT-PCR技术检测西瓜潜隐病毒的引物对、RT-PCR试剂、RT-PCR试剂盒及其应用和方法。

背景技术

西瓜潜隐病毒(citrullus lanatus cryptic virus,CiLCV)是近年来在西瓜上新发现的重要病害病毒，是双分病毒科(Partitiviridae)丁型双分病毒属(Deltapartitivirus)的成员。由两条dsRNA片段组成。其中dsRNA-1全长1603nt，含有一个编码RdRp的ORF；dsRNA-2全长1466nt，含有一个编码CP的ORF。该病毒最早是2013年在以色列被发现，2017年在我国河南首次被报道，2019年在北京西瓜上检出。该病毒可由种子以较高的效率传递给后代幼苗，而且大多数西瓜品种的种子均可以传播该病毒。该病毒在苗期症状不明显，但后期可与多种瓜类病毒如WMV、ZYMV、CGMMV、MABYV、MNSV混合发生，引发植株矮小，叶片畸形等多种症状，严重危害西瓜产业。鉴于该病毒隐蔽性强，危害大，建立快速、便捷的分子检测方法，加强该病毒在种子，种苗上的检测，是目前防控该病毒病害的关键。而目前尚缺乏该病毒的特异性和敏感性的引物和检测方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题为如何检测西瓜潜隐病毒、或如何检测待测植物样本是否感染西瓜潜隐病毒。为了解决上述技术问题，本发明依据RNA1的保守区域RdRP设计特异性引物，可快速、精准、灵敏检测该病毒。

本发明第一方面提供了一种用于扩增西瓜潜隐病毒基因组片段的引物对，所述引物对包括第一引物和第二引物；

所述第一引物的核酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述第二引物的核酸序列如SEQID NO.2所示；

或者，所述第一引物与所述第二引物是能够用于扩增如SEQ ID NO.3或SEQ IDNO.4所示核苷酸序列的引物对；

或者，所述第一引物与所述第二引物是能够用于扩增所述西瓜潜隐病毒的如SEQID NO.3或SEQ ID NO.4所示核苷酸序列的同源序列的引物对。

本发明第二方面提供了一种用于扩增西瓜潜隐病毒基因组片段的试剂，所述试剂包括本发明第一方面所述的引物对。

在一些实施方式中，所述第一引物与所述第二引物的摩尔比为1:1。

在一些实施方式中，所述试剂还包括反转录酶和/或DNA聚合酶。

在一些实施方式中，所述试剂还包括阳性对照样品，所述阳性对照样品可以为感染西瓜潜隐病毒的植物叶片，也可以为西瓜潜隐病毒本身，还可以是人工合成的如SEQ IDNO.3所示的核苷酸序列。

本发明第三方面提供了一种用于扩增西瓜潜隐病毒基因组片段的试剂盒，所述试剂盒中含有本发明第一方面所述的引物对或本发明第二方面所述的试剂。

本发明第四方面提供了本发明第一方面所述的引物对、本发明第二方面所述的试剂或本发明第三方面所述的试剂盒在如下a1或a2中的应用：

a1、检测西瓜潜隐病毒；

a2、制备检测西瓜潜隐病毒的制剂；

在一些实施方式中，a1是指：

检测待测植物材料是否感染西瓜潜隐病毒；或