[发明专利]一种大鼠血浆中麝香通心滴丸蟾蜍二烯内酯成分的检测方法及其用途

权利要求书

1.一种大鼠血浆中麝香通心滴丸蟾蜍二烯内酯成分的检测方法，其特征在于，所述方法采用超高效液相色谱-串联质谱对大鼠血浆中蟾蜍二烯内酯成分进行检测，所述蟾蜍二烯内酯成分包括沙蟾毒精、远华蟾毒精、去乙酰华蟾毒精、蟾毒灵和酯蟾毒配基。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)血浆测试样品处理：取灌胃麝香通心滴丸大鼠血浆，加入内标物混匀，加入甲醇，涡旋，离心；取上清液，氮气吹干，加入甲醇复溶，涡旋，离心，取上清液过滤膜，制得血浆测试样品；所述内标物为替硝唑溶液；

(2)标准曲线制备：在空白大鼠血浆中加入蟾蜍二烯内酯成分标准品，制成系列标准曲线样品；采用步骤(1)的方法，将标准曲线样品代替灌胃麝香通心滴丸大鼠血浆，制备得到标准曲线血浆样品；将标准曲线血浆样品注入超高效液相色谱—串联质谱仪进行分析；以蟾蜍二烯内酯成分的浓度为横坐标，蟾蜍二烯内酯成分与内标物的峰面积比值为纵坐标，进行回归，得到标准曲线；

所述液相色谱条件为：色谱柱：AcquityBEH C18(100mm×2.1mm，1.7μm)；柱温：30～40℃；进样量：5～10μL；流速：0.25～0.35mL/min；流动相A为1～3mmol/L乙酸铵溶液，流动相B为乙腈，梯度洗脱程序如下：

时间(min)	流动相A(％)
0～6	80→(78～72)
6～(10～13)	(78～72)→(48～53)
(10～13)～13.1	(48～53)→5
13.1～15	5

(3)含量测定：将步骤(1)制得的血浆测试样品采用步骤(2)的超高效液相色谱—串联质谱法进行检测，得到蟾蜍二烯内酯成分与内标物峰面积的比值，将所述比值代入步骤(2)中拟合的标准曲线进行计算，即可得到血浆测试样品中蟾蜍二烯内酯成分的浓度。

3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)血浆测试样品处理中，取灌胃麝香通心滴丸大鼠血浆100～300μL，加入2.5～10μL浓度为1～5μg/mL的内标物溶液，混匀，加入0.3～1.5mL甲醇，涡旋5～10min，2～6℃8000～12000r/min离心5～15min；取上清液，室温下氮吹至近干，加入200～500μL甲醇复溶，涡旋5～15min，2～6℃8000～12000r/min离心5～10min，取上清液过滤膜，制得血浆测试样品。

4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)血浆测试样品处理中，取灌胃麝香通心滴丸大鼠血浆200μL，加入5μL浓度为2μg/mL的内标物溶液，混匀，加入1mL甲醇，涡旋5min，4℃10000r/min离心10min；取上清液，室温下氮吹至近干，加入300μL甲醇复溶，涡旋5min，4℃10000r/min离心5min。