[发明专利]一种用于鉴别珠芽蓼的引物、鉴别方法及其应用

权利要求书

1.一种用于鉴别珠芽蓼的引物，其特征在于，包括如下所示的一对特异性引物：

正向引物ZF68：5’-GTCTGCATGGGCGTCA-3’，如SEQ ID NO.1所示；

反向引物ZR239：5’-GCGATGTTCGGAGGCT-3’，如SEQ ID NO.2所示。

2.一种用于鉴别珠芽蓼的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1中所述的引物。

3.一种用于鉴别珠芽蓼的PCR扩增体系，其特征在于，所述扩增体系包括权利要求1中所述的引物或权利要求2中所述的试剂盒。

4.权利要求1所述的引物或权利要求2所述的试剂盒或权利要求3所述的扩增体系在鉴别珠芽蓼中的应用。

5.一种利用权利要求1中引物鉴别珠芽蓼的方法，其特征在于，包括：

(1)提取待测样品的DNA；

(2)使用所述的特异性PCR引物对所述待测样品的DNA进行PCR扩增：

(3)取步骤(2)得到的PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，得到电泳图谱，比对待测样品中的电泳图谱进行珠芽蓼的真伪鉴别：当样品仅在172bp处扩增出一条DNA目标条带时，即鉴定样品为珠芽蓼。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)的PCR反应体系为25μL，包括：DNA模板的用量为25～150ng，正向引物ZF68和反向引物ZR239的用量各为5×10^-6～10×10^-6μmol，补足ddH₂O至25μL。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)的PCR反应体系为25μL，包括：2×PrimeSTAR Max premix酶12.5μL，DNA模板的用量为25～50ng，正向引物ZF68和反向引物ZR239的用量各为7.5×10^-6μmol，补足ddH₂O至25μL。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)的PCR反应参数为：95℃预变性3min；95℃变性10s，54℃退火10s，72℃延伸10s，共30轮；最后72℃延伸5min。

9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(1)提取待测样品DNA之前，先采用核分缓冲液反复洗涤待测样品粉末，然后再进行DNA的提取；优选地，所述核分缓冲液使用前加入β-巯基乙醇，终浓度为0.4％。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述核分缓冲液的制备为：称取2g PVP至100mL容量瓶，加适量超纯水溶解完后，再加入10mL 1M Tris-HCl、4mL 0.5M EDTA和1mL 0.07MNaCl溶液，加超纯水定容至刻度。