[发明专利]一种用于鉴别珠芽蓼的引物、鉴别方法及其应用

说明书

本发明属于生物鉴别领域，具体涉及一种用于鉴别珠芽蓼的引物、鉴别方法及其应用。具体地，所述鉴别珠芽蓼的引物为引物对ZF68和ZR239；鉴别方法包括：(1)样品DNA提取；(2)使用引物对待测样品进行PCR扩增；(3)取PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测。本发明提供的可以快速、准确、灵敏地实现珠芽蓼的鉴别，引物特异性强，准确度高，扩增效果好，重复性好，耐受性好。

技术领域

本发明涉及生物鉴别领域，具体涉及一种用于鉴别珠芽蓼的引物、鉴别方法及其应用。

背景技术

珠芽蓼(Polygonum viviparum L)是蓼科蓼属拳参组的植物，在中国分布于东北、华北、河南、西北及西南。生长于海拔1200-5100米的山坡林下、高山或亚高山草甸。珠芽蓼干燥根茎为传统藏药材，记载于1995年版《中华人民共和国卫生部药品标准藏药(第一册)》和2010版《青海省藏药炮制规范》中具有清热，止泻，行血化淤的；珠芽蓼果实含有丰富的糖、蛋白质、氨基酸和矿物质，药用价值较高；而珠芽蓼茎叶为非药用部位，目前对其研究较少。由于珠芽蓼药材的功效确切，其已被成功开发成中药新药珠芽蓼止泻颗粒和珠芽蓼止泻胶囊。因此，对于珠芽蓼质量控制研究有助于保障整个产业的健康发展。

由于蓼科植物尤其是珠芽蓼、拳参、圆穗蓼、草血碣等在性状上尤为相似，很难通过性状进行鉴别，且市场上经常将这几味药材混淆使用，这对中药材行业的健康发展极为不利。目前仅有几篇文献报道通过显微鉴别(《拳参及其类似品的生药鉴别与鞣质含量》，上海医科大学学报，1994，21(3:)：129-134)、理化鉴别(《一种拳参与珠芽蓼、草血碣的鉴别方法》，CN201910441314.8)对蓼科植物进行鉴别，但因市场上蓼科植物性状相似，较难采购到基源确切的样品，经常出现药材混淆买卖，这极大地限制了蓼科植物的真伪鉴别。因此，如何行之有效的鉴别蓼科植物真伪已然是蓼科植物检测工作的难点。

发明内容

本发明的目的是提供了一种鉴定珠芽蓼的特异性引物、试剂盒、方法及其应用。本发明首次对珠芽蓼进行了特异性引物的设计，适用于检测或辅助检测待测样品中是否含有珠芽蓼；鉴定或辅助鉴定待测样品是否为珠芽蓼。本发明提供的特异性引物对通过PCR技术可以快速、准确、灵敏地实现上述应用，且引物特异性强，准确度高，扩增效果好，重复性好，耐受性好。

具体地，一方面，本发明提供了一种用于鉴别珠芽蓼的引物，包括如下所示的一对特异性引物：

正向引物ZF68：5’-GTCTGCATGGGCGTCA-3’，如SEQ ID NO.1所示；

反向引物ZR239：5’-GCGATGTTCGGAGGCT-3’，如SEQ ID NO.2所示。

另一方面，本发明提供一种用于鉴别珠芽蓼的试剂盒，其包括本发明所述的用于鉴别珠芽蓼的引物。

另一方面，本发明提供一种用于鉴别珠芽蓼的PCR扩增体系，其特征在于，所述扩增体系包括本发明所述的引物。

另一方面，本发明提供一种用于鉴别珠芽蓼的PCR扩增体系，其特征在于，所述扩增体系包括本发明所述的试剂盒。

另一方面，本发明提供本发明所述的引物或试剂盒或扩增体系在鉴别珠芽蓼中的应用。

另一方面，本发明提供一种使用本发明所述引物鉴别珠芽蓼的方法，其包括以下步骤：

(1)提取待测样品的DNA；

(2)使用所述的特异性PCR引物对所述待测样品的DNA进行PCR扩增：

(3)取步骤(2)得到的PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，得到电泳图谱，比对待测样品中的电泳图谱进行珠芽蓼的真伪鉴别：当样品仅在172bp处扩增出一条DNA目标条带时，即鉴定样品为珠芽蓼。