[发明专利]一种磁微粒化学发光法测定细胞角蛋白19片段含量的试剂盒在审

专利信息
申请号: 202110072767.5 申请日: 2021-01-20
公开(公告)号: CN112730839A 公开(公告)日: 2021-04-30
发明(设计)人: 柳建敏;郭俊美;汪云峰 申请(专利权)人: 宁波海壹生物科技有限公司
主分类号: G01N33/574 分类号: G01N33/574;G01N33/543;G01N33/535;G01N21/76
代理公司: 宁波市鄞州盛飞专利代理事务所(特殊普通合伙) 33243 代理人: 王玲华;洪珊珊
地址: 315040 浙江省宁波*** 国省代码: 浙江;33
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摘要:
搜索关键词: 一种 微粒 化学 发光 测定 细胞 角蛋白 19 片段 含量 试剂盒
【权利要求书】:

1.一种磁微粒化学发光法测定细胞角蛋白19片段含量的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括细胞角蛋白19片段抗体标记的磁微粒试剂、细胞角蛋白19片段抗体标记的碱性磷酸酶试剂;

所述细胞角蛋白19片段抗体标记的磁微粒试剂中,细胞角蛋白19片段抗体标记的磁微粒的浓度为0.05-1mg/ml;所述细胞角蛋白19片段抗体标记的碱性磷酸酶试剂中,细胞角蛋白19片段抗体标记的碱性磷酸酶浓度为0.05-2μg/ml。

2.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述细胞角蛋白19片段抗体标记的磁微粒试剂的制备方法包括以下步骤:磁微粒重悬后加入细胞角蛋白19片段抗体,再加入反应催化剂,在24-42℃下混悬反应4-24h,然后加入封闭剂于24-42℃条件下混悬反应6-24小时进行封闭,清洗后,加入磁微粒保存液重悬获得细胞角蛋白19片段抗体标记的磁微粒试剂。

3.根据权利要求1或2所述的试剂盒,其特征在于,细胞角蛋白19片段抗体与磁微粒的质量比为(0.1-2):100。

4.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,所述封闭剂为0.5-3wt%的牛血清蛋白溶液、0.5-3wt%的酪蛋白溶液、BlockmasterTM CE210、BlockmasterTM CE510、BlockmasterTM DB1130、BlockmasterTM PA1080中的一种或者几种。

5.根据权利要求2或4所述的试剂盒,其特征在于,所述封闭剂为0.5-3wt%的酪蛋白溶液、BlockmasterTM CE210、BlockmasterTM CE510以体积比1:(0.8-1.5):(0.8-1.5)形成的混合液。

6.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,磁微粒保存液pH为6-9,包括:0.01-0.2mol/L Tris缓冲液,0.1-0.5mol氯化钠,0.1-10wt%的牛血清蛋白、酪蛋白、γ球蛋白(牛)中的一种或几种,1.0-5wt%Triton X-405,0.01-5wt%表面活性剂S9,0.5-5wt%的表面活性剂RPE1740、表面活性剂RPE2520的一种或两种,0.5-10wt%PEG2000、PEG4000、PEG6000、PEG8000、PEG10000、PEG20000中的一种或几种,0.5-10wt%葡聚糖,0.5-10wt%明胶,0.1-5.0wt%十六烷基三甲基溴化铵和/或月桂基三甲基溴化铵,0.05-5.0wt%Proclin系列防腐剂和/或叠氮钠。

7.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,细胞角蛋白19片段抗体标记的碱性磷酸酶试剂的制备方法包括以下步骤:

S1、活化抗体:将细胞角蛋白19片段抗体过脱盐柱,洗脱液浓缩至2-4mg/ml;加入二硫代苏糖醇或三(2-羰基乙基)磷盐酸盐,20-30℃下反应10-30min;加入pH 7.0-7.4、0.5-2mol/L甘氨酸溶液,继续反应5-10min,过脱盐柱,洗脱液浓缩至2-4mg/ml,得活化的细胞角蛋白19片段抗体溶液;

S2、活化碱性磷酸酶:将碱性磷酸酶过脱盐柱,洗脱液浓缩至2-4mg/ml;加入LC-SMCC溶液,20-30℃下反应10-30min;加入pH 7.0-7.4、0.5-2mol/L的甘氨酸溶液,继续反应10-20min,过脱盐柱,洗脱液浓缩至2-4mg/ml,得活化的碱性磷酸酶溶液;

S3、按细胞角蛋白19片段抗体和碱性磷酸酶质量比1:(0.5-2)将活化的细胞角蛋白19片段抗体溶液和活化的碱性磷酸酶溶液混合,加入0.1-0.5mol/L氯化镁溶液,2-8℃反应8-20h;

S4、将连接物纯化,然后加入缓冲液稀释备用。

8.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括抗体缓冲液,所述抗体缓冲液pH为7.0-9.0,包括牛血清蛋白、酪蛋白、海藻糖、阻断剂中的一种或几种。

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