[发明专利]一种评估冠心病预后分子标志物NFIA及其逆转录引物、扩增引物和应用

说明书

本发明公开评估冠心病预后分子标志物NFIA及其逆转录引物、扩增引物和应用，评估冠心病预后分子标志物NFIA核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.1所示，逆转录引物的核苷酸序列为序列表中SEQ ID No.2所示，上游引物和下游引物为序列表中SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示，评估冠心病预后分子标志物NFIA在制备评估冠心病预后实时荧光定量PCR检测试剂盒中的应用。通过检测冠心病患者血浆中NFIA mRNA的表达水平，可以对冠心病患者做出预后检查诊断，准确率高达92％以上，并进行及时治疗，降低患者复发率和生存质量，具有深远的临床应用意义和推广应用价值，经济和社会效益巨大。

技术领域

本发明涉及心血管病分子生物学技术领域。具体地说是一种评估冠心病预后分子标志物NFIA及其逆转录引物、扩增引物和应用。

背景技术

目前心血管疾病(cardiovascular disease，CVD)已成为我国城乡居民第一大死亡原因，2016年统计表明CVD死亡率仍居各病之首，高于肿瘤及其他疾病，农村为45.01％，城市为42.61％，且我国CVD患病率及死亡率仍处于上升阶段。微小RNA(microRNA或miRNA)是一类约22个核苷酸组成的小分子非编码RNA，通过与靶基因转录生成的mRNA 3’端非翻译区(3’untranslated region，3’UTR)结合后，于转录后水平调控该基因的表达及功能，广泛参与各种生理病理过程。miRNAs在心血管疾病中的表达、功能、作用机制研究是近年来国内、外学者关注的热点。研究发现微小RNA-223(miRNA-223)在血小板、血浆中均高度表达，主要参与调控血小板、内皮细胞功能，在血栓性CVD的发生、发展的病理生理过程中起着非常重要的作用，可作为评估血小板活化以及抗血小板药物疗效及冠心病(coronray heartdisease，CHD)预后的新型生物学标记物。

NFIA是NFI家族(NFIA、NFIB、NFIC、NFIX)的成员之一，可以通过同二聚体形式或者家族内部成员之间结合形成的异二聚体形式结合，也可与半识别位点TTGGC或GCCAA以低亲和力结合，从而发挥转录调节作用。在人粒细胞分化过程中miR-223可作用于NFIA转录后翻译，抑制其表达。我们在前期研究中发现Dami细胞在PMA的诱导下，miR-223表达显著升高，而NFIA和p65的表达明显降低，以上提示miR-223可能通过靶向调控NFIA表达介导NFκB通路，进而调控血栓形成及炎症反应。但是，目前NFIA在CVD病理生理过程中的具体作用机制也亟需更多、更深层挖掘验证。

发明内容

为此，本发明所要解决的技术问题在于提供评估冠心病预后分子标志物NFIA及其逆转录引物、扩增引物和应用，可有效解决制备评估冠心病预后的试剂盒的问题。

为解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：

一种评估冠心病预后分子标志物NFIA，为非编码RNA，其转录本长度为140个核苷酸，该核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.1所示。

一种评估冠心病预后分子标志物NFIA的逆转录引物，逆转录引物的核苷酸序列为序列表中SEQ ID No.2所示。

一种评估冠心病预后分子标志物NFIA的扩增引物，扩增引物包括上游引物和下游引物，上游引物和下游引物为序列表中SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示。

上述评估冠心病预后分子标志物NFIA在制备评估冠心病预后实时荧光定量PCR检测试剂盒中的应用。

上述评估冠心病预后分子标志物NFIA在制备评估冠心病预后实时荧光定量PCR检测试剂盒中的应用，所述的评估冠心病预后实时荧光定量PCR检测试剂盒包括：上述评估冠心病预后分子标志物NFIA的逆转录引物、上述特异性扩增引物、内参基因18S表达的特异性扩增引物序列，其上游引物和下游引物序列为序列表中SEQ ID No.4和SEQ ID No.5、从血浆中提取miRNA以及进行逆转录和荧光定量PCR的试剂。