[发明专利]一种评估冠心病预后分子标志物miR-302e及其逆转录引物、扩增引物和应用

权利要求书

1.一种评估冠心病预后分子标志物miR-302e，其特征在于，为非编码RNA，其转录本长度为17个核苷酸，该核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.1所示。

2.一种评估冠心病预后分子标志物miR-302e的逆转录引物，其特征在于，逆转录引物的核苷酸序列为序列表中SEQ ID No.2所示。

3.一种评估冠心病预后分子标志物miR-302e的扩增引物，其特征在于，扩增引物包括上游引物和下游引物，上游引物和下游引物为序列表中SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示。

4.如权利要求1所述的评估冠心病预后分子标志物miR-302e在制备评估冠心病预后实时荧光定量PCR检测试剂盒中的应用。

5.根据权利要求4所述的评估冠心病预后分子标志物miR-302e在制备评估冠心病预后实时荧光定量PCR检测试剂盒中的应用，其特征在于，所述的评估冠心病预后实时荧光定量PCR检测试剂盒包括：权利要求2所述的评估冠心病预后分子标志物miR-302e的逆转录引物、权利要求3所述特异性扩增引物、内参基因U6表达的特异性扩增引物序列，其上游引物和下游引物序列为序列表中SEQ ID No.5和SEQ ID No.6、从血浆中提取miRNA以及进行逆转录和荧光定量PCR的试剂。

6.根据权利要求5所述的评估冠心病预后分子标志物miR-302e在制备评估冠心病预后实时荧光定量PCR检测试剂盒中的应用，其特征在于，所述的评估冠心病预后实时荧光定量PCR检测试剂盒包括：

(1)从冠心病或健康者中抽提总RNA所用试剂：包括Trizol液20mL、氯仿80mL、异丙醇80mL、抑制RNA降解溶剂40mL、体积分数为75％的乙醇30mL，DEPC水10mL；

(2)以总RNA为模板进行逆转录所用试剂：包括评估冠心病预后分子标志物miR-302e的逆转录引物：浓度为10μM，30μL；内参基因U6的下游引物：浓度为10μM，30μL；逆转录反应缓冲液5×RT Buffer 150μL；逆转录酶M-MLV浓度200U/μL，50μL；

(3)将cDNA实时定量PCR：包括miRNA-302e实时荧光定量PCR特异性引物：浓度均为3μM，各25μL；内参基因U6表达的特异性扩增引物：浓度均为3μM，各25μL；实时荧光定量SYBR染料SYBR Green qPCR Mix 500μL；无RNA酶的水25μL。

7.根据权利要求5所述的评估冠心病预后分子标志物miR-302e在制备评估冠心病预后实时荧光定量PCR检测试剂盒中的应用，其特征在于，评估冠心病预后实时荧光定量PCR检测试剂盒的检测方法为：

(1)血浆RNA的抽提；

(2)miRNA-302e RNA的逆转录；

(3)利用miRNA-302e的特异性引物进行实时定量PCR；

(4)miRNA-302e表达量的数据分析：采用相对定量方法2^-△△Ct法。