[发明专利]一种评估冠心病预后分子标志物miR-302e及其逆转录引物、扩增引物和应用

说明书

本发明公开评估冠心病预后分子标志物miR‑302e及其逆转录引物、扩增引物和应用，评估冠心病预后分子标志物miR‑302e核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，逆转录引物的核苷酸序列为序列表中SEQ ID No.2所示，扩增引物包括上游引物和下游引物，上游引物和下游引物为序列表中SEQ ID No.3和SEQID No.4所示，评估冠心病预后分子标志物miR‑302e在制备评估冠心病预后实时荧光定量PCR检测试剂盒中的应用。miR‑302e作为评估冠心病预后新的分子标志物，可评估冠心病预后，并对冠心病患者进行治疗，延长患者生存时间，提高生存率，是冠心病上的一大创新，经济和社会效益巨大。

技术领域

本发明涉及心血管病分子生物学技术领域。具体地说是一种评估冠心病预后分子标志物miR-302e及其逆转录引物、扩增引物和应用。

背景技术

目前心血管疾病(cardiovascular disease，CVD)已成为我国城乡居民第一大死亡原因，2016年统计表明CVD死亡率仍居各病之首，高于肿瘤及其他疾病，农村为45.01％，城市为42.61％，且我国CVD患病率及死亡率仍处于上升阶段。

微小RNA(microRNA或miRNA)是一类约22个核苷酸组成的小分子非编码RNA，通过与靶基因转录生成的mRNA 3’端非翻译区(3’untranslated region，3’UTR)结合后，于转录后水平调控该基因的表达及功能，广泛参与各种生理病理过程。miRNAs在心血管疾病中的表达、功能、作用机制研究是近年来国内、外学者关注的热点。

研究发现微小RNA-302e(miR-302e)在血小板、血浆中均高表达，主要参与调控血小板、内皮细胞功能，在血栓性CVD的发生、发展的病理生理过程中起着非常重要的作用，可作为评估血小板活化以及抗血小板药物疗效及冠心病(coronray heart disease，CHD)预后的新型生物学标记物。

发明内容

为此，本发明所要解决的技术问题在于提供评估冠心病预后分子标志物miR-302e及其逆转录引物、扩增引物和应用，可有效解决制备评估冠心病预后的试剂盒的问题。

为解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：

一种评估冠心病预后分子标志物miR-302e，为非编码RNA，其转录本长度为17个核苷酸，该核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.1所示。

一种评估冠心病预后分子标志物miR-302e的逆转录引物，逆转录引物的核苷酸序列为序列表中SEQ ID No.2所示。

一种评估冠心病预后分子标志物miR-302e的扩增引物，扩增引物包括上游引物和下游引物，上游引物和下游引物为序列表中SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示。

上述评估冠心病预后分子标志物miR-302e在制备评估冠心病预后实时荧光定量PCR检测试剂盒中的应用。

上述评估冠心病预后分子标志物miR-302e在制备评估冠心病预后实时荧光定量PCR检测试剂盒中的应用，所述的评估冠心病预后实时荧光定量PCR检测试剂盒包括：上述评估冠心病预后分子标志物miR-302e的逆转录引物、上述特异性扩增引物、内参基因U6表达的特异性扩增引物序列，其上游引物和下游引物序列为序列表中SEQ ID No.5和SEQ IDNo.6、从血浆中提取miRNA以及进行逆转录和荧光定量PCR的试剂。

上述评估冠心病预后分子标志物miR-302e在制备评估冠心病预后实时荧光定量PCR检测试剂盒中的应用，所述的评估冠心病预后实时荧光定量PCR检测试剂盒包括：

(1)从冠心病或健康者中抽提总RNA所用试剂：包括Trizol液20mL、氯仿80mL、异丙醇80mL、抑制RNA降解溶剂40mL、体积分数为75％的乙醇30mL，DEPC水10mL；